.

Прогностичні фактори, що впливають на перебіг та результати програмної терапії ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 у дітей з гострою лімфобластною лейкемією (атореферат)

Язык: украинский
Формат: реферат
Тип документа: Word Doc
135 3705
Скачать документ

АКАДЕМІЯ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ

Інститут гематології та трансфузіології

Дорош Ольга Ігорівна

УДК: 616. 155.392-036.11+616.155.392.2-036]-053-085

Прогностичні фактори, що впливають на перебіг та результати програмної
терапії ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 у дітей з гострою лімфобластною лейкемією

14.01.31 – гематологія та трансфузіологія

Автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата медичних наук

Київ – 2006

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана в Інституті патології крові та трансфузійної медицини
АМН України, м. Львів

Науковий керівник: – доктор медичних наук, професор

Виговська Ярослава Іллівна,

Інститут патології крові та
трансфузійної

медицини АМН України, м.
Львів,

провідний науковий співробітник відділу гематології

Офіційні опоненти: – доктор медичних наук, професор

Гайдукова Світлана Миколаївна,

Київська медична академія післядипломної освіти ім. П.Л.Шупика

МОЗ України, завідувач кафедри гематології та трансфузіології

– доктор медичних наук, cтарший науковий співробітник

Бруслова Катерина Михайлівна,

Науковий центр радіаційної медицини АМН України,

завідувач відділення радіаційної гематології дитячого віку

Провідна установа: – Інститут онкології АМН України, м.Київ

Захист дисертації відбудеться “ 20 ” _березня_ 2006 р. о __15_ год. _30_
хв. на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.612.01 в Інституті
гематології та трансфузіології АМН України (04060 м. Київ вул.
М.Берлинського, 12)

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Інституту гематології та
трансфузіології АМН України (04060 м. Київ вул. М. Берлинського, 12)

Автореферат розісланий „17” лютого 2006 року.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради
Гащук Г.П.

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми. Cеред злоякісних новоутворень дитячого віку гостра
лейкемія (ГЛ) становить 30,0-35,0%, з них 80,0-90,0% припадає на гостру
лімфобластну лейкемію (ГЛЛ). Результати лікування у дітей з ГЛЛ значно
покращилися у зв’язку з застосуванням сучасних програм лікування: BFM,
UKALL, POG, CCG, COALL, FRALLE, AEIOP (Nachman J. et al, 1993; Arico M.
et al., 1995; Schrappe M et al., 1997; Radwaсska U. i in., 1998; Pui
C.H., 2000; Schrappe M et al., 2000; Hann I et al., 2001; Baruchel A.
2003). Повне одужання досягається у 70,0-75,0% хворих. Однак у решти
20,0-25,0% пацієнтів спостерігається рецидив хвороби. Приблизно у 10,0%
дітей причиною смерті є важкі інфекційні процеси, зумовлені
агранулоцитозом, і геморагічні ускладнення (Бруслова К.М. і ін., 1995;
Chojnowski K., 2000; Гайдукова С.М., 2001, M?ller H.J. et al., 2001;
Дроздова В.Д. і ін., 2002).

ГЛЛ характеризується значною гетерогенністю клінічних проявів та
перебігу, розбіжностями морфологічних, імунофенотипових та генетичних
ознак лімфобластів, що частково може пояснювати різну ефективність
застосовуваної терапії, тривалості ремісії та життя хворих. Багатьма
дослідниками показано зв’язок між перебігом хвороби, ефективністю
лікування та низкою прогностичних чинників (Бруслова К.М. і ін., 1995;
Pui C.H. et al., 1999; Ng S.M. et al., 2000; Гайдукова С.М., 2001;
Felice M. S. et al., 2001; Le Clerc J.M. et al., 2002; Бебешко В.Г. і
ін., 2003). Детальне вивчення причин, що призводять до неефективності
лікування ГЛЛ за стандартними протоколами, дає підстави до формування
груп ризику та відповідно створення нових диференційованих підходів до
лікування дитячих лейкемій. У міру того, як лікування ГЛЛ стало
інтенсивнішим і результативнішим, деякі з критеріїв прогнозування
втратили своє значення. Крім того, немає стандартизованих підходів до
оцінки терапії, тому прогностична цінність окремих чинників неоднозначна
при використанні різних програм лікування.

В Україні з початку 90-х років минулого століття застосовується
інтенсивна хіміотерапія, що створена на основі програми ALL-BFM 90, яка
привела до значного поліпшення результатів лікування ГЛЛ у дітей (Кубаля
Н.А., 2002). Тому визначення прогностичних факторів, що впливають на
перебіг хвороби та результати лікування ГЛЛ при застосуванні саме
програмної цитостатичної терапії ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 (базова програма ALL-BFM
90/95), є актуальною науковою задачею. Суттєве значення має виділення
серед великої кількості клініко-гематологічних проявів хвороби та
біологічних ознак лейкемічних лімфобластів тих, які мають прогностичне
значення, та оцінка ступеня їх прогностичної вартості. Треба зауважити,
що в літературі немає консенсусу щодо визначеного набору прогностичних
критеріїв, пропоновані критерії в низці випадків недостатньо
обґрунтовані. Зокрема, досі фактично кінцево не з’ясовано значення
аберантної чи асинхронної коекспресії на лімфобластах маркерів інших
ліній. Не встановлено зв’язку між перервами у протокольній терапії та
особливостями перебігу і прогнозом ГЛЛ. Вищенаведене зумовило потребу
поглибленого вивчення клініко-гематологічних показників і перебігу ГЛЛ в
умовах програмної терапії ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 та виділення на основі
комплексного підходу прогностичних чинників, які б знайшли практичне
застосування в дитячій гематологічній клініці.

Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Обраний напрямок
дослідження безпосередньо пов’язаний з НДР Інституту патології крові та
трансфузійної медицини АМН України “Вивчити особливості стану здоров’я
дітей, вилікуваних від онкогематологічних захворювань з метою розробки
заходів, скерованих на покращення якості їх життя” (№ Державної
реєстрації 01.99U001400) та “Характеристика віддалених наслідків
імуносупресивної дії програмної терапії гострої лімфобластної лейкемії у
дітей” (№ Державної реєстрації 01.03U000296). Автор дисертації була
співвиконавцем названих робіт.

Мета дослідження. Визначити прогностичні фактори перебігу гострої
лімфобластної лейкемії у дітей при проведенні програмної терапії
ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 (базовий протокол “ALL-BFM 90/95”) та розробити комплекс
критеріїв для моніторингу розвитку хвороби та прогнозування ефективності
лікування.

Задачі дослідження.

Визначити клініко-гематологічні особливості ГЛЛ у дітей при окремих
імунологічних підваріантах хвороби;

Перевірити інформативність визнаних прогностичних критеріїв, дати оцінку
прогностичної вартості деяких клініко-гематологічних показників при
лікуванні дітей за протоколами ГЛЛ-ДГЛУ 93/95;

Дослідити зв’язок між антигенною характеристикою лімфобластів (рівень
експресії лімфоїдних маркерів, коекспресією аберантних і асинхронних
маркерів) і терапевтичною відповіддю, тривалістю клініко-гематологічної
ремісії, розвитком рецидиву ГЛЛ та смертю;

З’ясувати причини і тривалість перерв у протокольній терапії та їх вплив
на прогноз та подальший перебіг хвороби;

Проаналізувати показники безподійного та безрецидивного виживання,
кумулятивне виживання залежно від опрацювання прогностичних факторів;

Визначити комплекс прогностичних чинників перебігу хвороби, оцінити їх
діагностичну придатність та виділити мінімальний набір незалежних
достатньо чутливих і специфічних прогностичних факторів для клінічного
використання.

Об’єкт дослідження: 125 дітей з вперше діагностованою гострою
лімфобластною лейкемією, які лікувались у гематологічному відділенні
Обласної дитячої спеціалізованої клінічної лікарні (ОДСКЛ) м.Львова з
1993 року до 2003 року.

Предмет дослідження: клінічні та гематологічні характеристики дітей,
хворих на гостру лімфобластну лейкемію, цитоморфологічні, цитохімічні та
імунофенотипові властивості бластів кісткового мозку, відповідь на
ініціальну терапію преднізолоном, зменшення проліферативного синдрому,
досягнення клініко-гематологічної ремісії, причини та тривалість перерв
у протокольній терапії, визначення безподійного, безрецидивного
виживання та кумулятивного виживання у кореляції з прогностичними
факторами.

Методи дослідження: загальноклінічні (результати об’єктивного та
інструментального обстеження, діагностика ускладнень, аналіз програми
лікування та перебігу хвороби), цитологічні (гемограма, мієлограма),
цитохімічні (реакція на пероксидазу, ліпіди, кислу фосфатазу,
неспецифічну естеразу, PAS-реакція, дослідження цитоплазматичних
маркерів мієлоїдного та лімфоїдного елементів гемопоезу), імунологічні
(дослідження лінійних та диференційних лімфоїдних і мієлоїдних маркерів
мембрани лімфобластів методом протічної цитофлюорометрії), статистичні
(математична обробка результатів, визначення кривих виживання).

Наукова новизна. Вперше визначено прогностичні фактори перебігу ГЛЛ у
дітей при проведенні програмної терапії ГЛЛ-ДГЛУ 93/95.

Встановлено низку незалежних чинників прогнозування події (відсутність
ефекту від лікування, рецидив, смерть), імовірність розвитку рецидиву та
летального наслідку при різних підваріантах ГЛЛ. Показано, що
несприятливими клінічними та параклінічними прогностичними чинниками
щодо безподійного виживання є вік дітей до 3 років або понад 9 років,
ініціальна лімфаденопатія (розміри лімфатичних вузлів понад 1 см),
збільшення розмірів печінки та селезінки, наявність медіастинальної
пухлинної маси, початковий лейкоцитоз 100,0 Г/л і більше, активність
реакції на кислу фосфатазу в цитоплазмі лімфобластів у вигляді гранул,
відсутність відповіді на преднізолонову префазу. Доведено, що
несприятливими імунофенотиповими ознаками є належність хворих до
Т-лінійної та про-В ГЛЛ, коекспресія на бластах В-, Т-клітинних і
мієлоїдних маркерів (В+Т+Му ГЛЛ), наявність антигенів CD38 та CD13.
Засвідчено, що коекспресія інших мієлоїдних маркерів не впливає на
показники безподійного виживання, рецидивування. Доведено, що до
прогностично сприятливих імунофенотипових властивостей лейкемічних
бластів є наявність на їх поверхні маркерів CD10, CD20, CD34.

Вперше показано вплив перерв у програмній цитостатичній терапії ГЛЛ на
рецидивування хвороби. Виявлена пряма залежність між частотою розвитку
рецидивів ГЛЛ та тривалістю зупинок при проведенні протоколу ІІ понад 20
днів, а також сумарною тривалістю перерв терапії першого гострого
періоду понад 40 днів та проведенні протоколу М у неповному обсязі.

Доведено, що визнані прогностичні критерії треба використовувати у
комплексі з визначенням аберантної та асинхронної коекспресії на
лімфобластах інших ліній, тривалістю перерв та змінами введення
цитостатиків у протокольній терапії.

За допомогою дискримінантного аналізу вперше розроблено і визначено
комплекс прогностичних факторів перебігу хвороби та виділено мінімальний
набір незалежних критеріїв для прогнозування ефективності лікування за
програмами ГЛЛ-ДГЛУ 93/95.

Практичне значення роботи. Визначено комплекс прогностичних чинників, що
дозволяє прогнозувати перебіг ГЛЛ у дітей і на цій основі удосконалити
тактику лікування хворих. Сформульовано алгоритм прогнозування рецидиву
гострої лімфобластної лейкемії у дітей при застосуванні програмної
терапії ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 і отримано свідоцтво на рацпропозицію №1808 від
22 червня 2005 (видане Львівським національним медичним університетом
ім. Данила Галицького). Результати дисертації впроваджено в практичну
діяльність гематологічного відділення ОДСКЛ м. Львова, Державної
обласної дитячої клінічної лікарні м.Івано-Франківська, у роботу
консультативної поліклініки Інституту патології крові та трансфузійної
медицини АМН України, навчальний процес кафедри дитячих хвороб №2 з
курсом дитячої хірургії факультету післядипломної освіти лікарів
Державного медичного університету, м. Івано-Франківськ та кафедри
педіатрії та неонатології ФПДО Львівського національного медичного
університету ім. Данила Галицького, що підтверджено актами впровадження.

Особистий внесок здобувача. Автором особисто визначено і обґрунтувано
актуальність та ступінь вивчення проблеми теми за даними наукових
видань, визначено перелік аналізованих факторів та опрацьовано методи
дослідження, здійснено відбір та опрацювання методик дослідження.
Дисертантом сформульовані мета і задачі роботи. Автором заплановано і
виконано представлені у роботі дослідження відповідно до груп
спостереження, самостійно проведено лікування хворих, встановлено
діагноз за комплексом клінічних та клініко-лабораторних даних.
Проведення програм хіміотерапії та супровідного лікування дітей, хворих
на ГЛЛ, відбувалось з безпосередньою участю автора. Дисертантом
проаналізовано імунофенотипове дослідження лейкоцитарних антигенів
бластних клітин у хворих на лейкемії дітей до лікування, освоєно і
самостійно проведено цитологічні та цитохімічні дослідження мазків
периферичної крові та кісткового мозку на різних етапах хіміотерапії
згідно із розробленим алгоритмом. Дисертантом створено базу даних,
статистично оброблено отримані дані, розроблено таблиці, рисунки і
графіки та інтерпретовано результати досліджень. Виявлені закономірності
сформульовані у наукових висновках.

Клінічні і загальні клініко-лабораторні дослідження проводились на базі
гематологічного відділення ОДСКЛ м. Львова (завідувач відділення –
к. мед. н. Р.С.Поліщук). Цитологічні, цитохімічні та імунофенотипові
дослідження кісткового мозку та периферичної крові проводились на базі
клінічної лабораторії ОДСКЛ м.Львова (завідувач лабораторії – к.мед.н.
А.В.Петрух). Експертні заключення по мазках кісткового мозку та
периферичної крові давалися Референтною лабораторією Інституту
експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Кавецького
НАНУ (керівник лабораторії – д.мед.н., проф. Д.Ф.Глузман).

Апробація результатів дисертації. Результати роботи представлено і
обговорено під час виступів на VIII конгресі Світової Федерації
українських лікарських товариств (Львів-Трускавець, 2000 р.), на
науково-практичній конференції “Досягнення дитячої онкогематологічної
служби за останні 10 років”, (Клініка Св. Анни м. Відень, Австрія,
березень 2002 р.), на міжнародній Австро-Українській конференції
“Досягнення у дитячій онкогематології” (м.Львів, жовтень 2002 р.); на
науково-практичній конференції “Проблеми онкоімунології: наукові та
прикладні аспекти” (м. Київ, травень 2003 р.); на ІІІ Всеукраїнській
науково-практичній конференції “Питання імунології в педіатрії” (м.Київ,
вересень 2003 р.); на міжнародній школі-семінарі “Актуальні питання
цитометрії” (м.Київ, жовтень 2003 р.); на науково-практичній конференції
“Гематологія і трансфузіологія: фундаментальні та прикладні
питання”(м.Київ, жовтень 2005 р.), на науково-практичній конференції
“Актуальні проблеми гематології та трансфузійної медицини ”(м.Львів,
листопад 2005 р.). Результати досліджень доповідались на
науково-практичних конференціях у Львівській обласній дитячій
спеціалізованій клінічній лікарні (м.Львів, 2002, 2003 р.).

Публікації. Всього за матеріалами дослідження опубліковано 12 наукових
робіт, з яких 6 статтей в наукових журналах та збірниках, що
рекомендуються ВАК України як фахові, і 5 тез доповідей матеріалів
з’їздів та конференцій.

Обсяг і структура дисертації. Дисертація викладена на 193 сторінках
комп’ютерного друку. Робота складається зі вступу, огляду літератури,
трьох розділів власних досліджень, аналізу та узагальнення отриманих
даних, висновків, практичних рекомендацій, списку використаних джерел,
який містить 264 джерела, та 5 додатків. Робота ілюстрована 61 таблицями
та 34 рисунками.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Огляд літератури. У розділі представлено загальна характеристика гострої
лімфобластної лейкемії у дітей, її клініко-гематологічні особливості.
Описано сучасні програми терапії гострої лімфобластної лейкемії у дітей,
також їх ефективність, тривалість безподійного виживання залежно від
варіантів хвороби та особливостей перебігу. Висвітлено
клініко-гематологічні аспекти прогнозування перебігу ГЛЛ у дітей та
відповіді на лікування. Відзначається особлива роль ефективності префази
в прогнозуванні відповіді на лікування та тривалості безподійного
виживання. Автор підтримує деяких дослідників, які стверджують, що
наявність прогностично несприятливих факторів не може бути причиною
застосування паліативних методів лікування, а повинні розглядатися
тільки у контексті можливості змін терапії, яка покращила б її
ефективність.

Матеріали та методи дослідження. Обстежено 125 дітей із вперше
діагностованою ГЛЛ, які лікувалися у гематологічному відділенні ОДСКЛ,
м. Львів з 1 лютого 1993 р. до 5 липня 2001 р. Відстеження віддалених
результатів припинено 1 жовтня 2003 р.

Діагноз гострої лейкемії встановлювався на підставі клінічної картини,
даних аналізу периферичної крові, цитологічного дослідження стернального
пунктату (відсоток бластів > 25% усіх нееритроїдних клітин), а лімфоїдну
належність бластів виявляли за допомогою морфологічного та цитохімічного
досліджень мазків кісткового мозку і крові.

Терапія проводилась за модифікованими програмами ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 (базові
програми ALL-BFM 90/95). Така модифікація програм є загальноприйнятою в
клініках дитячої онкогематології України, правомірною і узгодженою із
Європейським дослідженням ALL-BFM. Вона полягала у наступному: а)
редукція дози МТХ у протоколі М до 1 г/м2 замість 5 г/м2; б) у програмі
ГЛЛ-ДГЛУ 95 діти групи низького ризику отримували протокол Іа, де
застосовувались лише два введення даунорубіцину; в) пацієнтам групи
високого ризику проводилось лікування відповідно з терапевтичним планом
для хворих групи середнього ризику.

Оцінку ефективності терапії проводили згідно з такими критеріями: повна
клініко-гематологічна ремісія вважалась досягнутою, коли після
завершення терапії 1 фази протоколу І на 33-ій день у кістковому мозку
було не більше 5% бластних клітин; не було локальних лейкемічних
інфільтратів, у лікворі не виявляли бластів; первинно-резистентними – що
не відповідали на лікування (non responder, NR) вважали хворих, у
пунктаті кісткового мозку яких на 33-й день та після завершення
протоколу І виявляли понад 5% бластних клитин і/або бласти у
спинно-мозковій рідині; ранньою смерть вважалась у випадку, коли вона
наступила до 33-о дня протоколу І; смерть вважали як таку, що настала у
ремісії, коли вона виникла від будь-якої причини після досягнення
клініко-гематологічної ремісії на різних етапах протокольного лікування
та після його закінчення; подія – це поняття включало: 1) рецидив; 2)
резистентність до терапії; 3) смерть; 4) виникнення вторинної пухлини.

Статистичну обробку виконували за допомогою пакету програм “STATISTICA
FOR WINDOWS 5.0” (Боровков В.П., 2001). Аналіз 10-річного безподійного
та безрецидивного виживання, смерті у групах хворих, які обстежувались,
проводився методом Каплан-Мейера з оцінкою кумулятивного відсотка
виживання у різні терміни.

У роботі застосовувались загальноклінічні (наявність збільшених
лімфатичних вузлів, печінки, селезінки, екстрамедулярних пухлинних
інфільтратів, проявів нейролейкемії, анемічного та геморагічного
синдромів, інфекційних ускладнень), цитологічні (підрахунок гемограми та
мієлограми, у паноптично забарвлених за Мей-Грюнвальд-Гімза мазках
кісткового мозку та периферичної крові, цитозу ліквору, у препаратах,
виконаних на цитоспіні). Для типування цитоморфологічного підваріанту
користувались критеріями FAB-класифікації. Проводились наступні
цитохімічні реакції: на мієлопероксидазу методом Льоель, на ліпіди
методом забарвлення суданом чорним В за Aккерман, на полісахариди за
допомогою PAS-реакції за Мак Манус, на неспецифічну естеразу (НЕ)
методом азосполучення з використанням субстрату ?-нафтилацетату натрію,
кислу фосфатазу (КФ) методом азосполучення з використанням субстрату
нафтол-AS-BI-фосфат або нафтол-AS-MX-фосфат.

Імунофенотипові дослідження проведені методом проточної цитометрії з
використанням МКАТ (Becton Dickinson, США i Dako, Данія), кон’югованих з
флюорохромами флюоресцеїн-ізотіоціанатом (FITC) або фікоеритрином (PE).
Панель МКАТ включала 18 типів, направлених до різних кластерів
диференціації (cluster differentiation, CD): лінійно-незалежні – CD34,
HLA-DR, CD38, CD10; B-лінійні – CD19, CD20, CD22; Т-лінійні – CD1, CD2,
CD3, CD4, CD5, CD7, CD8; мієлоїдні – CD13, CD14, CD15, CD33. Маркування
клітин МКАТ і аналіз результатів на апараті FACScan (Becton Dickinson,
США) проводили відповідно до рекомендацій фірми-виробника з
калібруванням проточного цитометра CaliBRITE Beads, програмним
забезпеченням AutoCOMP та за умови негативного ізотипового контролю. У
дослідженнях застосовано також подвійне маркування з використанням
наступних комбінацій МКАТ: CD19/CD34, CD19/CD33, CD19/CD38, CD10/CD38,
CD10/CD19, CD10/CD34, CD33/CD34. експресією антигена вважали позитивною,
коли частка бластів, на поверхні яких знаходився антиген, складала не
менше 20% для лімфоїдних та лінійно-незалежних і 30% для мієлоїдних
маркерів (Uckun F.M. et al., 1997; Ng S.M. et al., 2000).

Для оцінки лінійної належності бластних клітин користувались критеріями
діагностики GALGB (Czuczman M.S. et al., 1999). Принципи
імунофенотипової діагностики EGIL (Бене М.К. и др., 1996; K?rholz D. et
al., 1998) враховано частково, оскільки в дослідження не включено
цитоплазматичні маркери.

Результати власних досліджень, їх аналіз та узагальнення. Серед
обстежених було 72 хлопчики (57,6%) та 53 – дівчинки (42,4%). Медіана
віку пацієнтів становила 5 років 8 міс. (коливання від 3 міс. до 15
років 8 міс.), в тому числі медіана віку хлопчиків була 5 років 7 міс.
(коливання 3 міс. – 15 років 7 міс.) і дівчаток 5 років 8 міс. (9 міс. –
15 років 8 міс.). Серед них переважали діти віком від 1 до 6 років – 65
осіб (52,0%), менш чисельними були групи хворих віком старших за 6 років
– 56 (44,8%) пацієнтів. Дітей до одного року було четверо (3,2%).

За морфологією бласти розподілялись, згідно з FAB-класифікацією, таким
чином: у більшості хворих L1 – 82 (65,6%), значно менше було випадків L2
– 25 (20,0%) та L1-2 – 18 (14,4%). Встановлено, що належність до певного
FAB-варіанту ГЛЛ не має зв’язку зі статтю хворого (р=0,95).

Всім 125 дітям із вперше діагностованою ГЛЛ проведено цитохімічне
дослідження бластних клітин. Активність мієлопероксидази, НЕ та реакція
на ліпіди з суданом чорним у бластах всіх пацієнтів була негативною.
PAS-реакція була від’ємною – у 1 (0,8%) особи, дифузною – у 7 (5,6%) та
дрібнозернистою – у 17 (13,6%) хворих, зернистою у 16 (12,8%) дітей,
гранулярною – у 84 (67,2%) хворих. Встановлено, що у бластних клітинах
хлопчиків переважав гранулярний характер PAS-реакції (р=0,043). У
цитоплазмі лімфобластів 18 (14,4%) пацієнтів було виявлено додатню
цитохімічну реакцію на КФ у вигляді гранул та у одного дрібно
ґранулярний тип реакції. Слабо дифузна реакція була у 15 (12,0%) хворих,
переважали діти із від’ємною реакцією на КФ – 91 (72,8%) особа. Не
знайдено достовірної різниці характеру реакції на активність КФ у
бластах залежно від статі хворого (р=0,12).

Імунофенотипування бластних клітин кісткового мозку проведено у 68
хворих.

На основі аналізу антигенної структури мембрани лейкемічних клітин
дітей, хворих на ГЛЛ, та, враховуючи критерії класифікації ГЛ за GALGB і
частково EGIL, В-лінійну ГЛЛ встановлено у 56 хворих дітей (82,4%),
Т-клітинну – у 12 пацієнтів (17,6%). В-лінійну лейкемію діагностували за
експресією В-клітинних маркерів CD19 чи CD20, Т-клітинну як CD2 чи CD7
позитивну без В-антигенного маркування. На цій підставі виділено 4
варіанти В-лінійної і 4 – Т-лінійної ГЛЛ. Варіанти ГЛЛ: про-В (ВІ) – 7
осіб, common-В (ВІІ) – 38 хворих, пре-В (ВІІІ) – 11 дітей, про-Т (ТІ) та
пре-Т (ТІІ) – по 2 хворих, кортикальний Т (ТІІІ) та зрілий Т(ТIV) – по 4
дітей. У дослідження даної роботи не включено хворих на В зрілоклітинну
ГЛЛ (ВІV), оскільки вони не лікувались за програмами ГЛЛ-ДГЛУ 93/95, як
усі представлені пацієнти. Т-лінійну ГЛЛ об’єднано в одну групу
внаслідок малочисельності окремих підваріантів.

У 20 хворих (29,41%) виявлено експресію тільки В клітинних антигенів, у
6 пацієнтів (8,82%) на В-бластах верифіковано асинхронні Т-клітинні
маркери, у 23 хворих (33,82%) констатували аберантну експресію
мієлоїдних антигенів, а у 7 хворих (10,30%) спостерігали одночасно
коекспресію на лейкемічних бластах В-, Т-клітинних та мієлоїдних
антигенів. Т-лінійну ГЛЛ без експресії антигенів інших ліній встановлено
у 9 (13,24%) хворих дітей і у 3 (4,41%) Т бласти мали мієлоїдні маркери.
Більшість дітей віднесено до групи середнього ризику (ГСР) – 85 (68,0%)
осіб. Пацієнтів групи низького ризику (ГНР) та групи високого ризику
(ГВР) було відповідно 25 (20,0%) та 15 (12,0%). Не виявлено значущого
зв’язку належності дітей до певної терапевтичної групи ризику зі статтю
хворого (р>0,05).

Всі хворі на гостру лімфобластну лейкемію отримували програмну терапію
ГЛЛ-ДГЛУ 93 або 95. Серед 125 пацієнтів, які розпочали лікування,
клініко-гематологічну ремісію на 33-й день терапії було досягнуто у 118
(94,4%) осіб, один хворий (0,8%) виявився первинно-резистентним до
терапії, відсоток бластів у кістковому мозку становив у нього на 33-й
день – 50,0%, та по закінченні протоколу І — 29,0%. Його було переведено
на інтенсивну високодозову терапію. Пацієнт помер від прогресування
захворювання. За досліджуваний період спостереження зареєстровано 16
смертей. До досягнення кістково-мозкової ремісії на 33-й день терапії
індукції констатовано 6 випадків. Основною причиною смерті у цей період
були важкі геморагічні ускладнення. Дві смерті сталися на фоні
преднізолонової префази внаслідок синдрому лізису пухлинної маси: один
хворий помер на 3-й день лікування та другий пацієнт – на 8-у добу
протоколу І, у них розвинувся геморагічний інсульт. У 3 випадках
причинами смерті були бактерійно-геморагічні ускладнення, одна особа
померла на фоні агранулоцитозу від вогнищевої бронхопневмонії.
Переважною причиною смерті у хворих на ГЛЛ дітей після досягнення
клініко-гематологічної ремісії були: сепсис бактерійного або
комбінованого грибкового генезу. Лише у двох випадках були інші причини:
одна дівчинка померла під час введення ін’єкції цитозару у протоколі ІІ
раптово від гострої серцево-судинної недостатності (ГССН) та в одному
випадку причиною смерті була гостра печінкова недостатність з
фульмінантним перебігом гепатиту В. Смерть у ремісії здебільшого
реєструвалась під час проведення протокольної терапії (у 7 із 10 осіб).
Одна особа померла у ремісії від сепсису та ДВЗ синдрому на етапі
підтримуючої терапії. Інші два летальних випадки виникли після
завершення повного курсу лікування від важких бактерійних та грибкових
ускладнень. У 21 дитини (19,4% із 108 хворих, з вилученням померлих та
одного резистентного до лікування) зареєстровано рецидив хвороби.
Перебували у ремісії станом на 1 жовтня 2003 року 87 дітей (69,6%). З
них 56 (44,8%) хворих спостерігалися понад 5 років і подій (рецидив,
резистентність до терапії, смерть) у них не було зареєстровано. За час
дослідження події (рецидив, резистентнісь до терапії, смерть)
зареєстровано у 38 хворих (30,4%). Усі події відбувались не пізніше 60
місяця з початку спостереження. Кумулятивний відсоток виживання за весь
період спостереження складає 68,0% (рис.1). Аналіз частоти досягнення
кістково-мозкової ремісії на 33-й день індукційного лікування показав,
що цей показник є досить високим (94,4%), оскільки лише один пацієнт не
відповідав на терапію.

Відповідь на преднізолонову префазу оцінено у 124 дітей, оскільки одна
дитина померла від геморагічних ускладнень на 3-й день лікування. Добру
відповідь на ініціальну терапію преднізолоном (Prednisone-Good-Responce,
PGR), коли абсолютна кількість бластів на восьмий день протоколу І
становила менше 1,0 Г/л, відзначено у переважної кількості хворих – 112
осіб (90,3%). У 12 дітей (9,7%) число бластів у периферичній крові
становило більше 1,0 Г/л, серед них дівчаток було 5 та 7 хлопчиків.
З’ясовано, що первинна відповідь на ініціальну терапію преднізолоном не
залежить від статі хворої дитини та FAB-варіанту лімфобластів (р>0,05).
Встановлено гіршу відповідь на преднізолон у дітей, хворих на Т-клітинну
ГЛЛ, порівняно з В-лінійною лейкемією. У цих хворих залишалися вищими
кількість лейкоцитів, відсоток бластів у периферичній крові та число
хворих зі збільшеними периферичними лімфатичними вузлами. Наявність чи
відсутність коекспресії мієлоїдних маркерів на лімфобластах не впливала
на число бластів і лейкоцитів у периферичній крові та зменшення
проліферативного синдрому на 8-й день лікування преднізолоном (р>0,05).

Встановлено, що безподійне виживання (event-free survival, EFS) є
гіршим у дітей: віком до 3 років та понад 9 років (EFS 57,6% проти 79,9%
у старших за 3 р. молодших за 9 р., р=0,012), з ГВР (EFS 40,0% проти
75,0% з ГНР та 70,9% з ГСР, р=0,002), з додатньою реакцією на КФ у
вигляді гранул у лімфобластах (EFS 52,1% проти 70,9% із від’мною
реакцією, р=0,036), з ініціальною кількістю лейкоцитів 100,0 Г/л і
більше (EFS 46,1% проти 70,6% з числом лейкоцитів `„IX ^ J L N P R T V X Z r v ¦ ^`I^ ///oooooooo//eeeTHeeeOee „? d?th^„? „› d?th^„› ???? ?????th???? ?? ????????th?¤?$ ??????? 4ння RFS при різних морфоцитохімічних (FAB) підваріантах ГЛЛ (р=0,9), він не був також пов’язаний з рівнем Hb (р=0,24), кількістю еритроцитів (р=0,35), числом лейкоцитів (р=0,09), ініціальною бластемією (р=0,46) і кількістю тромбоцитів (р=0,086) у периферичній крові та ініціальним відсотком бластів у кістковому мозку (р=0,38). Не знайдено також значущого зв’язку активності реакції на КФ у бластах з RFS (р=0,42). Відсоток RFS достовірно відрізнявся залежно від характеру розподілу глікогену у цитоплазмі бластів. З’ясовано, що в осіб із гранулярною та зернистою реакцією на глікоген у бластних клітинах рецидиви трапляються рідше, ніж у пацієнтів з іншими типами PAS-реакції (RFS становить відповідно 84,5% проти 59,8%, р=0,0035). При порівняльному аналізі не знайдено вірогідної відмінності між середніми показниками гемограми у дітей з рецидивом та хворими, в яких рецидиву не було зареєстровано упродовж 5 років після досягнення кістково-мозкової ремісії (р>0,05).

Вірогідно частіше рецидив виникав при пре-В ГЛЛ порівняно з common-В
підваріантом лейкемії (RFS 54,5% проти 81,6% відповідно, р=0,024) окремо
від інших підгруп (при аналізі усієї групи різниця маскувалася через
ефект множинних порівнянь). Спостерігається тенденція до меншого числа
рецидивів у хворих на common-В ГЛЛ порівняно з дітьми, хворими на інші
підваріанти лейкемії (RFS 81,6% проти 64,9% у хворих з не common-B ГЛЛ
(BІ+ВІІІ+Т), р=0,069). Відзначено тенденцію до частішого рецидивування у
осіб, хворих на Т-ГЛЛ, порівняно з В+Т підваріантом лейкемії (RFS 72,9%
проти 85,7% відповідно, р=0,057). Низький показник безрецидивного
виживання відмічається у дітей, хворих на ГЛЛ, з аберантною коекспресією
мієлоїдних маркерів (кМу) на лімфобластах, які мали погану відповідь на
преднізолон (Prednisone-Poor-Responce, PPR) (0% проти 54,8% у PGR з кМу,
р=0,032).

Достовірно частіше рецидиви виникали у хворих з негативною експресією
антигенів CD34 (RFS 51,9% проти 83,6% з CD34+, р=0,022) та CD20 (RFS
54,0% проти 91,7% з CD20+, р=0,013). У групі дітей з рецидивом ГЛЛ
вірогідно вищим був рівень експресії антигену CD13 (медіана 53,0% проти
10,0% без рецидиву, р=0,036) та CD38 (медіана 95,0% проти 6,5% без
рецидиву, р=0,01).

Отримані результати свідчать про пряму залежність між частотою розвитку
рецидивів і тривалістю зупинок при проведенні протоколу ІІ понад 20 днів
(RFS у дітей з перервою у протоколі ІІ ?20 днів було 84,6% та понад 20
днів – 60,9%, р=0,009) (рис. 5), а також сумарною тривалістю перерв при
проведенні терапії першого гострого періоду ГЛЛ понад 40 днів (RFS у
дітей з тривалістю перерви > 40 днів 72,0% проти 83,0% 100,0 Г/л (кумулятиний % виживання 65,2%
проти 87,5% з числом лейкоцитів 0,05).

Виявлено, що вірогідно меншим було виживання хворих на ГЛЛ, у котрих на
8-й день індукційного лікування рівень лейкоцитів перевищував 10,0 Г/л
(кумулятиний % виживання 64,7% проти 88,9% з числом лейкоцитів 9 р 0,7500 0,9200 5,8500 0,0180

Відповідь на преднізолон 0,7300 0,9500 3,8900 0,0520

Розміри селезінки, до лікування 0,7200 0,9500 3,3600 0,0700

Здовження тривалості

протоколу ІІ 0,7100 0,9700 2,1600 0,1500

Група ризику 0,7000 0,9700 1,7300 0,1900

Кінцева точність прогнозу становить 77,33%, при тому, що чутливість
даної функції (коректність передбачення рецидиву складає лише 38,10%)
дуже низька, натомість специфічність (коректність щодо виявлення
безрецидивного виживання) достатньо висока – 92,59%. Негативне
предиктивне значення складає 79,4%, а позитивне предиктивне значення –
66,7%. На підставі вищевказаних критеріїв можна достатньо впевнено
окреслити певну групу пацієнтів, в яких рецидиву не буде, однак важко
точніше судити про ту групу дітей, в яких розвинеться рецидив.

Введення маркерів CD10, CD13 і CD34 у дискримінантну функцію забезпечує
поліпшення її чутливості щодо передбачення рецидивів. Водночас
поліпшується також і негативне предиктивне значення – 85,7%, та
позитивне предиктивне значення – 87,5%. На підставі цього аналізу ми
можемо в однаковій мірі передбачити як добрий, так і поганий результат.
Встановлено, що наявність позитивної експресії детермінанти CD13, та
навпаки негативної експресії антигенів CD10, CD34 на поверхні бластів є
незалежними прогностичними чинниками розвитку рецидиву у дітей, хворих
на ГЛЛ, поряд із погранично достовірним здовженням строків протоколу ІІ
понад 20 днів та з розмірами лімфовузлів понад 1 см в дебюті хвороби.
Включення усіх інших показників у покрокову регресію не підвищує її
точності (табл. 2).

Таблиця 2

Аналіз дискримінантної функції з маркерами: (передбачення рецидиву)

– покроковий метод. Лямбда Вілкса: 0,01411, p 20%, CD13 20%. (рис. 7).

Рис. 7. Алгоритм прогнозування рецидиву ГЛЛ у дітей

На підставі п’яти вищевказаних критеріїв (вік дітей понад 3 роки та
молодші за 9 років, належність хворих до ГНР та ГСР, добра відповідь на
преднізолон та від’ємна активність КФ у цитоплазмі бластів, розмір
периферичних лімфатичних вузлів менше 1 см) можна достатньо впевнено
окреслити групу пацієнтів, які залишаться живими, однак важко
передбачити хворих, в яких буде зареєстровано смертельні випадки. Так
негативне предиктивне значення становить 86,2%, а позитивне предиктивне
значення – 57,1%, тобто ми можемо достатньо надійно передбачити добрий
результат. При введенні у дискримінантний аналіз імунологічних маркерів
CD10 та CD34 прогнозування смертельних випадків відмічено тенденцію до
меншого числа померлих у дітей із додатньою експресією антигенів CD10 та
CD34 поряд із від’ємною реакцією на КФ у бластах та кількістю лейкоцитів
менше 10,0 Г/л на 8-й день преднізолонової префази (покроковий метод
Лямбда Вілкса, р 3 роки і 100,0 Г/л, відсутність відповіді на преднізолонову префазу.
Несприятливими імунофенотиповими ознаками є належність хворих до Т- та
про-В ГЛЛ, коекспресія на бластах В-, Т-клітинних і мієлоїдних маркерів
(В+Т+Му ГЛЛ), наявність антигенів CD38 та CD13. За допомогою
дискримінантного аналізу розроблено комплекс прогностичних чинників
перебігу хвороби та виділено мінімальний набір незалежних факторів для
прогнозу ефективності лікування ГЛЛ. Розроблено методику прогнозування
перебігу ГЛЛ у дітей на підставі сформульованого алгоритму. Ключові
слова: гостра лімфобластна лейкемія, діти, протокольне лікування,
прогностичні фактори, безподійне виживання, безрецидивне виживання,
летальний наслідок.

АННОТАЦИЯ

Дорош О.И. Прогностические факторы, что влияют на течение и результаты
программной терапии ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 у детей с острой лимфобластной
лейкемией.. – Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по
специальности 14.01.31 – Гематология и трансфузиология. Институт
гематологии и трансфузиологии АМН Украины, Киев, 2006.

В диссертации определены прогностические факторы течения острого
лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) у детей при проведении программной терапии
ГЛЛ-ДГЛУ 93/95 (базовый протокол ALL-BFM 90/95). Выделен ряд независимых
прогностических факторов, которые необходимо учитывать для
прогнозирования события, рецидива и смерти при разных
иммунофенотипических подвариантах ОЛЛ и в результате временного
нарушения проведения протокольного лечения. Показано, что
неблагоприятными прогностическими факторами безсобытийного выживания
являются возраст больных детей до 3 лет и после 9 лет, инициальное
увеличение размеров лимфоузлов более 1 см, печени и селезенки, наличие
медиастинальной опухоли, лейкоцитоз > 100,0 Г/л, отсутствие ответа на
преднизолоновую префазу. К неблагоприятным иммунофенотипическим
признакам относятся Т- и про-В ОЛЛ, коэкспрессия на бластах В-,
Т-клеточных и миелоидных маркеров (В+Т+Му ОЛЛ), присутствие антигенов
CD38 и CD13. С помощью дискриминантного анализа разработано комплекс
прогностических факторов течения ОЛЛ и выделено набор независимых
факторов для прогнозирования эффективности лечения ОЛЛ. Разработана
методика прогнозирования течения ОЛЛ у детей на основании
сформулированного алгоритма. Ключевые слова: острая лимфобластная
лейкемия, дети, протокольное лечение, прогностические факторы,
безсобытийное выживание, безрецидивное выживание, летальный исход.

SUMMARY

Dorosh О.І. Prognostic Factors of Clinical Course and Treatment Outcome
of programmed ALL-CALU 93/95 therapy in children with Acute
Lymphoblastic leukemia. – Manuscript. The thesis is presented for a
candidate’s degree in medicine, specialisation 14.01.31 – Hematology and
Transfusiology. – Institute of Hematology and Transfusioligy, of Academy
of Medical Sciences of Ukraine, Kyiv, 2006.

On the basis of complex evaluation of haematologic, cytomorphologic and
immunophenotypical data as well as analysing clinical features of the
disease in 125 children we estimated predictors of treatment outcome of
childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) in children treated by
ALL-CALU 93/95 treatment regimen (basis protocol ALL-BFM 90/95). We
established a bundle of independent prognostic factors of the event
(treatment failure, relapse and death), probability of relapse and
lethal outcome (early death, death after attaining the 1st remission on
different stages of protocol treatment and after treatment completion)
in different subtypes of ALL and after deviation in terms of programme
ALL treatment regimen. Poor prognostic factors of event-free survival
included the age of children under 3 years and above 9 years, liver and
spleen enlargement, mediastinal mass, WBC count 100,000 per L and more,
the absence of treatment response on prednizolone prefase treatment.
Unfavourable immunophenotypical features included T-lineage and
pro-B-lineage type of leukemia, coexpression of B-, T-cell and myeliod
markers in blast cells, (В+Т+Му ALL), presence of CD13 and CD38
antigens, absence of CD10, CD20 and CD34 expression. Taking into account
correlation of clinical and immunophenotypical features we worked out
the practical approach to recognition the patients with low risk of the
event on the basis of presense of 2 and more criteria of the 4 mentioned
(age 3–9 years, absence of liver and spleen enlargement, elongation of
the II protocol terms over 20 days, perfect response to prednizolone
therapy). We discovered straight correlation between ALL relapse
frequency and duration of breaks in protocol II ower 20 days and overall
duration of breaks in therapy of the 1st acute period over 40 days. We
noted correlation between relapse and impossibility of complete protocol
M performance. On the basis of discriminant analysis we worked out the
complex of predictors for clinical course of the disease and marked out
the minimal complex of independent factors for treatment efficiency
prognosis. Such clinical features included the age of patient under 3
and over 9 years, absence of treatment response in prednizolone phase,
hepatomegaly and elongation of protocol II by over 20 days (overall
correctness of prognosis is 72,3%). The low-risk group in terms of
relapse of ALL patients after ALL-CALU 93/95 treatment (negative
predictive value for relapse 85,7%) is characterized by age 3–9 years,
absence of peripheric lymphadenopathy and splenomegaly, belonging to
low-risk or standars risk group according to clinical features, positive
glycogen blast reaction in the form of granules, positive expression in
leucemic cells CD10, CD34 and the absence of CD13, perfect primary
response to prednizolone therapy, elongation of protocol II terms by
less than 20 days. Independent predictors of lethal outcome absence
(overall correctnesss of prognosis 77,3%) include the age of patient 3 –
9 years, belonging to low-risk or standard-risk group according to
clinical features, perfect primary response to prednizolone therapy;
enlargement of lymph nodes less than 1 cm and negative blast acid
phosphatase activity have border significance. We worked out the
methodology of relapse prognosis in children with ALL on the basis of
2-step algoritm: 1) recognition of risk group for relapse on the basis
of clinical data: age of patient over 3 and less than 9 years, absence
of peripheric lymphadenopathy and spleen enlargement, granular
PAS-reaction of blasts; 2) the patients of unfavourable group need
centralized evaluation for CD10, CD13, CD34 markers expression. Key
words: acute lymphoblastic leukemia, children, protocol treatment,
prognostic factors, event-free survival, relapse-free survival, lethal
outcome.

Є маркером Т-клітин, також субпопуляції В Іа

PAGE 1

Рис.1 Безподійне виживання дітей, хворих на ГЛЛ.

Рис. 2. Безподійне виживання дітей, хворих на ГЛЛ, з різною відповіддю
на преднізолон. Криві Каплан-Мейера, p 20%,

CD13 20%

ВРАХОВУЄТЬСЯ ОДИН З КРИТЕРІЇВ:

CD10 30%,

CD34

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Ответить

Курсовые, Дипломы, Рефераты на заказ в кратчайшие сроки
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020