.

Патогенез порушень ниркових функцій при експериментальному токсичному гепатиті, індукованому чотирихлористим вуглецем (автореферат)

Язык: украинский
Формат: реферат
Тип документа: Word Doc
126 2047
Скачать документ

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ’Я УКРАЇНИ

ОДЕСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

Гончарова

Л і л я В о л о д и м и р і в н а

УДК 612.466:616.36-0021:612.017.4:547.222

Патогенез порушень ниркових функцій при експериментальному токсичному
гепатиті, індукованому чотирихлористим вуглецем

14.03.04 – патологічна фізіологія

Автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата медичних наук

Одеса – 2006

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана в Одеському державному медичному університеті МОЗ
України.

Науковий керівник: доктор медичних наук, професор,

заслужений діяч науки та техніки України,

ГОЖЕНКО Анатолій Іванович

Одеський державний медичний університет

МОЗ України, завідувач кафедри

загальної та клінічної патофізіології

Офіційні опоненти:

доктор медичних наук, професор

Сервецький Костянтин Леонідович,

Одеський державний медичний університет

МОЗ України, завідувач кафедри інфекційних хвороб

з епідеміологією

доктор медичних наук, професор

Роговий Юрій Євгенович

Буковинський державний медичний університет

МОЗ України, професор кафедри фізіології

Провідна установа: Інститут експериментальної патології, онкології і

радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, відділ фізико-хімічних
механізмів сорбційної детоксикації, м. Київ

Захист дисертації відбудеться „7”лютого 2007 року о 13.00 годині на
засіданні спеціалізованної вченої ради Д 41.600.01 при Одеському
державному медичному університеті МОЗ України (65082, м. Одеса, пров.
Валіховський 2).

З дисертацією можна ознайомитися в бібліотеці Одеського державного
медичного університету (65082, м. Одеса, пров. Валіховський 3).

Автореферат розісланий „5” січня 2007 р.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради

к.мед.н., доцент
В.В. Годован

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми Відомо, що зниження ефективності механізмів, які
забезпечують водно-сольовий гомеостаз у пацієнтів з цирозом печінки (ЦП)
та гепатитом, має вторинний характер щодо відношення до основного
захворювання і залежить від ступеня важкості патологічних змін паренхіми
печінки (Квасницька О.Б., 2004; Moller S, 2004; Henriksen J.H., 2005).
Разом з тим, несприятливий прогноз розвитку ЦП обумовлений у тому числі
розвитком ниркової недостатності внаслідок порушення ниркового
кровообігу (Moreau R, Lebrec D., 2004). Тому зміни внутрішньоорганної
гемодинаміки нирок є одними з найбільш ранніх діагностичних критеріїв
функціональної недостатності печінки (Yalniz M. et al., 2003; Barada K.,
2004). Сукупність порушень функціонального стану нирок при патології
печінки відзначається як гепаторенальний синдром (ГРС). Встановлено, що
в патогенезі ГРС провідна роль відводиться активації
ренін-ангіотензинової системи (РАС) (Hayes P.C. et al., 1998) та також
перебудові функціонального стану осморецепторів печінки і центральної
нервової системі (Castellano G. et al., 1994).

В останні роки з’являються дані щодо участі в патогенезі ГРС системи
оксиду азоту (Turkau C. et al., 2004). Між тим, відмічені фактори є
суттєвим колом регуляції гепаторенальних міжорганних механізмів
забезпечення водно-сольової рівноваги в організмі (Ye V. Z. C., Duggan
K. A.(2), 2000). Але стан ниркових функцій та внутрішньониркових
гуморальних систем ауторегуляції на ранніх етапах патологічних змін
печінки досліджені недостатньо, тому що розвиток ГРС частіше розглядають
як наслідок довгострокових постійних патологічних процесів зі змінами
функціонального стану печінки (Guevara M., Rodes J., 2005). Так,
практично не вивчено стан основних ниркових процесів (клубочкової
фільтрації та канальцевої реабсорбції), особливо при різних станах
водно-сольового обміну, тобто за умов функціонального навантаження. Тоді
як відомо, що початкові порушення функції нирок можливо виявити лише за
умов роботи органа у різних режимах, тобто при адаптаційних реакціях.
Такий підхід щодо показників функціонального стану нирок із змінами
регуляторних систем дозволить детально описати механізми формування ГРС.

Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дослідження
виконувалися в межах планового наукового напрямку науково-дослідницької
роботи Одеського державного медичного університету МОЗ України
“Молекулярно-генетичні та екологічнозалежні механізми розвитку пухлин
репродуктивної системи: шляхи удосконалення, діагностики, лікування і
профілактики” (№ державної реєстрації 0102U006588). Дисертант є
співвиконавцем зазначеної теми.

Мета і задачі дослідження. Метою дисертаційної роботи було з(ясування
патогенезу ренальних дисфункцій, за умов комбінованого токсичного
ураження печінки при індукованому водному та сольовому діурезі.

Задачі дослідження:

1. З(ясувати функціональний стан нирок щурів через 24 год після
одноразового введення чотирихлористого вуглецю за умов індукованого
діурезу (водного та сольового).

2. З(ясувати особливості функціонального стану нирок щурів, які підпали
під комбінований вплив чотирихлористого вуглецю та сулеми за умов
індукованого діурезу.

3. Визначити особливості функціонального стану нирок та печінки токсично
уражених щурів та тлі дії блокатору ангіотензинконвертуючого ферменту за
умов індукованого діурезу.

4. Визначити та дослідити особливості стану циклу оксиду азоту за умов
надходження чотирихлористого вуглецю та сулеми в організм білих щурів.

5. Провести дослідження морфологічних змін нирок та печінки токсично
уражених щурів.

Об’єкт дослідження – функціональний стан нирок та структурні особливості
ниркової та печінкової тканин токсично уражених тварин.

Предмет дослідження – патогенетичні механізми ренальних дисфункцій в
початковий період токсичного ураження печінки за умов індукованого
діурезу.

Методи дослідження – патофізіологічні, біохімічні, гістологічні,
статистичні.

Наукова новизна отриманих результатів. На підставі оцінки результатів
комплексного дослідження вперше визначено, що зміни функції нирок
реєструються вже в початковий період пошкодження паренхіми печінки,
індукованого введенням чотирихлористого вуглецю. Вперше визначено, що
комбінований вплив дихлориду ртуті та чотирихлористого вуглецю посилює
прояви ренальних дисфункцій. Визначено, що порушення функціонального
стану нирок в експериментальних моделях ГРС мають помірний характер і
обумовлені, як прямим впливом ксенобіотиків на паренхіму печінки та
нирок, та також на механізми регуляції їх діяльності, включаючи РАС та
цикл оксиду азоту. За даними морфологічних та гістохімічних методів
дослідження вперше встановлено, що за патологічних змін тканин печінки,
які були індуковані чотирихлористим вуглецем, спостерігається зниження
активності NO-синтази в паренхімі нирок на тлі суттєвого посилення
активності NO-синтазного ланцюга циклу оксиду азоту в печінці при
зростанні виведення нирками ендогенних нітратів, що свідчить про
активацію синтезу оксиду азоту в печінці в початковий період її
токсичного ураження.

Вперше встановлено, що блокада РАС при призначенні каптоприлу за умов
одноразового введення чотирихлористого вуглецю збільшує ступінь порушень
функції нирок, що вказує на роль РАС щодо розвитку адаптаційних реакцій
цього органу як на прямий пошкоджуючий вплив чотирихлористого вуглецю,
так і на порушення гепаторенальних міжорганних механізмів регуляції
водно-сольового обміну.

Науково-практичне значення отриманих результатів. Одержані в роботі
результати досліджень конкретизують та доповнюють існуючі уявлення щодо
патогенезу ГРС. Отримані дані свідчать про те, що розвиток ГРС є
наслідком не тільки прямих ушкоджень паренхіми печінки, але і
обумовлений перебудовою гуморальних механізмів регуляції водно-сольового
обміну. Обґрунтовано, що при експериментальній патології печінки ознаки
ГРС найбільш яскраво виявляються за умов індукованого діурезу, а це
насамперед обґрунтовує доцільність використання навантажувальних проб
(водної та сольової) у діагностиці функціонального стану токсично
уражених нирок для виявлення найбільш інформативних ознак патології:
зміни величин клубочкової фільтрації, ниркового функціонального резерву,
екскреції білка, осмотично активних речовин та нітритів та є теоретичним
підґрунтям подальшої розробки діагностичних методик щодо виявлення
початкових проявів ГРС.

Результати роботи впроваджені в навчальний процес на кафедрі загальної
та клінічної патологічної фізіології Одеського державного медичного
університету, кафедрах патологічної фізіології Тернопільського
державного медичного університету ім. І.Я. Горбачевського,
Дніпропетровської державної медичної академії, Буковинського державного
медичного університету.

Особистий внесок дисертанта. Автором проведено патентно-інформаційний
пошук, обґрунтування схем дослідження, налагоджування експериментальних
моделей, вибір обсягів та методів дослідження. Дисертант самостійно
здійснював дослідження, статистичну обробку, аналіз, узагальнення та
інтерпретацію отриманих результатів, сформульовав основні положення та
висновки дисертації. Автор висловлює щиру подяку головному науковому
співробітнику УкрНИИ медичної реабілітації і курортології професору
Б.А. Насібулліну за консультування та допомогу у дослідженнях.

Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертаційної роботи
були оприлюднені на наукових конференціях молодих вчених та
спеціалістів: на Наукової конференції „ІІІ Читання ім. В.В.
Підвисоцького” (Одеса, 2004), на ІV національному конгресі
патофізіологів України з міжнародною участю „Фундаментальні аспекти
сучасної медицини” (Чернівці, 2004), на Наукової конференції „ІV Читання
ім. В.В. Підвисоцького” (Одеса, 2005), на ХІ Всеукраїнській
науково-практичній конференції “Сучасні досягнення валеології та
спортивної медицини” (Одеса, 2005), на Міжнародній науковій конференції
в межах року Росії в Україні „Гомеостаз: фізіологія, патофізіологія,
фармакологія і клініка” (Одеса, 2005).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 8 наукових робіт, з
них 4 наукові статті у фахових виданнях ВАК України, 4 – тези доповідей
на наукових конференціях та з’їздах.

Обсяг і структура дисертації. Дисертаційну роботу викладено на 174
сторінках машинописного тексту. Вона складається зі вступу, огляду
літератури, опису матеріалів і методів дослідження, трьох розділів
власних досліджень, аналізу та узагальнення результатів досліджень,
заключення, висновків. Текст дисертації ілюстровано 64 таблицями та 20
рисунками, список літератури містить 165 джерел, з них 123 – іноземні.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Матеріали та методи досліджень Експериментальні дослідження проведені на
кафедрі загальної та клінічної патофізіології Одеського державного
медичного університету із дотриманням вимог положення „Європейської
конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для
експериментальних та інших наукових цілей”. Комісією Одеського
державного медичного університету з питань експертизи біоетики (протокол
№105а; від „05” травня 2006 р.) порушень у проведені дослідів на
тваринах не виявлено. Дослідження проведені на 210 білих безпородних
щурах-самцях з вагою тіла 230-250 г, вивчали: 1) функцію нирок у
інтактних щурів; 2) вплив чотирихлористого вуглецю (CCl4) на функцію
нирок; 3) вплив дихлориду ртуті (HgCl2) (0,1 мг/100 г від маси тіла) на
функцію нирок щурів; 4) вплив комбінованої дії CCl4 та HgCl2 на функцію
нирок щурів; 5) функцію нирок у щурів на тлі введення каптоприлу; 6)
функцію нирок у щурів, яким вводили CCl4 и каптоприл; 7) функцію нирок у
щурів, яким вводили каптоприл на тлі комбінованої інтоксикації HgCl2
(0,1 мг/100 г від маси тіла) та CCl4.

Усі дослідження на щурах проводилися за умов індукованого діурезу
(Гоженко А.І., 1994). Вивчали осморегулюючу та екскреторну функцію,
динаміку змін кліренсу креатиніну, канальцевий транспорт осмотично
активних речовин (ОАР), концентраційну здатність нирок, ступінь
протеїнурії, функціональну спроможність нирок, щодо регуляції обміну
нітритів та нітратів за умов індукованого (водного та сольового)
діурезу. Індукований діурез: водне навантаження – відстояну, підігріту
до 37 0С водопровідну воду вводили внутрішньошлунково металевим зондом у
об’ємі 5% від маси тіла тварини. Сольове (осмотичне) навантаження: 3%
розчин хімічно чистого хлориду натрію вводили внутрішньошлунково
металевим зондом із розрахунку 5% від маси тіла. Сечу збирали впродовж
наступних 2 год у метаболічних клітках. Після збору сечі проводили
евтаназію тварин шляхом швидкої декапітації під легкою ефірною
анестезією. Біохімічному дослідженню підлягали біологічні рідини
організму – плазма крові та сеча. В отриманих зразках плазми крові і
сечі проводили аналіз хімічного складу за наступними методиками:
загальний білок у сечі визначали фотометрично (довжина хвилі 590 нм) на
“СФ-46” („Ломо”, виробництво Росія) сульфосаліциловим методом (Михеева
А.И. и соавт., 1969); креатинін плазми крові і сечі визначали також
фотометрично на “СФ-46” (довжина хвилі 520 нм) за реакцією з пікриновою
кислотою (Рябов С.И. и соавт., 1979); осмоляльність сечі та плазми крові
визначали загальноприйнятим кріоскопічним методом на осмометрі „3Д3”
(виробництво США) (Рябов С.И. и соавт., 1979), концентрацію нітритів,
нітратів та сечовини у плазмі крові і сечі визначали фотометрично
(довжина хвилі 540 нм) за методикою, запропонованою Н.Л. Емченко (1994).

Розрахунки показників функціонального стану нирок проводили за
формулами, запропонованими Ю.В. Наточіним (1974), О. Шюк (1981), та А.І.
Гоженко (1987). Вивчення впливу інгібіції ангіотензин-конвертуючого
ферменту (АКФ) на діяльність нирок щурів проводили за умов
внутрішньочеревного (в/ч) введення водного розчину каптоприлу
(„Дарниця”, Україна ) в дозі 1 мг на 100 г від маси тіла (одноразово)
впродовж 2 діб. Останнє введення – за 24 год до навантажувальних проб.
Токсичне ураження печінки викликали підшкірним введенням CCl4 (0,5 мл на
100 г від маси тіла) за 24 год до навантажувальних проб; токсичну
нефропатію моделювали одноразовим підшкірним введенням водного розчину
сулеми (HgCl2 – 0,1 мг на 100 г від маси тіла) за 3 доби до
навантажувальних проб за методом запропонованим проф. Б.А. Пахмурним
(1980). Комбіноване порушення функції нирок (токсичну нефропатію)
провокували введенням HgCl2 (0,1 мг на 100 г від маси тіла) за 3 доби до
навантажувальних проб і CCl4 (0,5 мл на 100 г від маси тіла) за 24 год
до навантаження. Вплив каптоприлу на розвиток токсичної нефропатії
вивчали на тлі в/ч введення водного розчину каптоприлу (1 мг на 100 г
від маси тіла) впродовж 2 діб, останнє введення – за 24 год до
навантаження. Морфологічні дослідження нирок та печінки проводили після
їх вилучення і занурення в ізотонічний розчин хлориду натрію, з
подальшою фіксацією у нейтральному 40% розчині формаліну. Для виконання
гістологічних методів дослідження брали шматочки щойно вилученої нирки
(її центральну частку) та печінки. Зрізи товщиною 5-7 мкм готували на
мікротомі на препаратах, що забарвлювали гематоксилін-еозином (Саркисов
Д.С., 1996). На зрізах вивчали зміни в структурній організації нефрону,
стан клітин мозкової та кіркової речовин ниркового клубочку, щільність
взаємоприлягання сусідніх клітин, епітелій проксимальних та дистальних
звивистих канальців, стан ендотелію судинного русла клубочкового
апарату, канальцевої ланки нефронів та інтерстиційної тканини.
Активність цитохромоксидази (ЦХО) визначали загальноприйнятим
гістохімічним методом (Burstone, 1959). Вивчали НАДФ-Н диафразу, як
маркер активності NO-синтази (Д.Е. Каржевський, 1996). Отримані дані
обробляли математично програмами „Exel-7” та „Biostat” (США).
Статистичний аналіз отриманих результатів проводили за загальноприйнятою
методикою з використанням критерію Ст’юдента.

Результати досліджень та їх обговорення. При гістологічних дослідженнях
через 24 год після введення CCl4 було видно, що виникають глибокі
некробіотичні зміни в паренхімі печінки з одночасним зменшенням
активності ЦХО та ознаками підвищення активності NO-синтази. Таким
чином, наступні дослідження функціонального стану нирок проводили у
щурів з ознаками токсичного гепатиту, що відповідає даним літератури
(Ю.І. Губський, 1989). Встановлено, що за умов водного навантаження CCl4
викликає підвищення діурезу майже на 17% одночасно зі збільшенням
протеїнурії, яка зростає удвічі (табл.1).

Таблиця 1

Функціональний стан нирок щурів через добу після введення CCl4

у дозі 0,5 мл/100 г від маси тіла при водному навантаженні, М±m, (n=10)

Показники Контроль Дослід

Діурез, мл/год 1,64±0,13 1,93±0,16

Екскреція білка, мг/год 0,067±0,005 0,146±0,012*

Концентрація креатиніну, мкмоль/л 1109±92 1998±165*

Екскреція креатиніну, мкмоль/год 1,82±0,15 3,87±0,32*

Концентрація нітритів, мкмоль/л 1,96±0,16 1,38±,12*

Екскреція нітритів, мкмоль/год (3,25±0,27) x 10-3 (2,64±0,22) x 10-3

Концентрація нітратів, мкмоль/л 4,24±0,35 6,16±0,52*

Екскреція нітратів, мкмоль/год 0,007±0,001 0,012±0,01*

Осмоляльність сечі, мосмоль/кг Н2О 125±11 171±14*

Екскреція ОАР, мосмоль/год 0,20±0,02 0,33±0,03*

Примітки у табл. 1-2:

p – показник вірогідності міжгрупових відмінностей;

n – число спостережень;

* – p

???????-??????????$?-????????-????-??>

@

B

D

F

H

J

L

N

P

?

?

?

>

?

I

„@

^„@

>

‚c†¶†6‡AE‡E‡TH‡nnaaaanannOCCCa????¬

a$

¤?`„7a$

§

§

§

§

§

§

§

§

§

§

§

±0,22 3,12±0,26

Концентрація нітритів, мкмоль/л 5,03±0,42 2,24±0,19*

Екскреція нітритів, мкмоль/год (4,46±0,37) x10-3 (1,85±0,15) x 10-3*

Концентрація нітратів, мкмоль/л 20,68±2,08 250,24±21,05*

Екскреція нітратів, мкмоль/год 0,018±0,002 0,205±0,017*

Осмоляльність сечі, мосмоль/кг Н2О 806±65 803±67

Екскреція ОАР, мосмоль/год 0,72±0,06 0,65±0,05

При сольовому навантаженні також зберігаються ознаки пошкодження нирок
(протеїнурія), поряд з суттєвими відмінностями, які спостерігаються з
боку ниркових механізмів обміну ендогенних нітратів та нітритів.
Виявлені порушення функції нирок обумовили розвиток ретенційної азотемії
із зростанням в плазмі крові креатиніну, сечовини. Цікавим було те, що
при водному навантаженні рівень клубочкової фільтрації у щурів після
введення ССl4 зростав, тоді як при сольовому навантаженні – зменшувався
з 719±61 мкл/хв до 570 ±48 мкл/хв (рТаблиця 4 Вплив каптоприлу на функціональний стан нирок щурів при введенні CCl4 і HgCl2+CCl4(при сольовому навантаженні, М±m (n=10) Показники Контроль +каптоприл CCl4 +каптоприл CCl4+HgCl2 +каптоприл Діурез, мл/год 2,32±0,19 0,95±0,08 p

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Ответить

Курсовые, Дипломы, Рефераты на заказ в кратчайшие сроки
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020