.

Стійкість до голодування і активність АДГ у Drosophila melanogaster із природних популяцій України

Язык: украинский
Формат: курсова
Тип документа: Word Doc
369 5205
Скачать документ

27

Курсова робота

Стійкість до голодування і активність АДГ у Drosophila melanogaster із
природних популяцій України

Реферат

Дослідження проводились в 2008 – 2009 роках на кафедрі генетики та
молекулярної біології ОНУ ім. І.І. Мечникова.

Метою досліджень було вивчення тривалості життя в умовах голодування та
визначення активності алкогольдегідрогенази у мух із природних популяцій
України.

Встановлено, що самки із популяцій Одеси, Варви і Пирятина були більш
витривалими в умовах голодування порівняно з самцями. Найбільшу
стійкість до голодування виявили мухи Одеської популяції, а найменшу –
мухи Київської популяції. стійким до голодування мухам із Одеської
популяції притаманна досить висока активність АДГ, а чутливим до
голодування мухам Київської популяції – менша активність ферменту.

В цілому в умовах проведеного експерименту не виявлено прямої залежності
між витривалістю мух в умовах голодування і активністю їх АДГ.

Зміст

Вступ

1. Огляд літератури

1.1 Стійкість до голодування як показник пристосованості

Drosophila melanogaster

1.2 Активність алкогольдегідрогенази у Drosophila melanogaster

2. Матеріали та методи досліджень

3. Результати досліджень та їх обговорення

Узагальнення

Висновки

Список цитованої літератури

Вступ

Концепція пристосованості організмів до оточуючого середовища є однією
із центральних в генетиці популяцій та в теорії еволюції.

Єдиною силою, що спрямовує еволюцію органічного світу, є природній
добір. Ця спрямовуюча дія добору проявляється і на початкових етапах
еволюційних змін, що відбуваються в популяціях. Поняття
”пристосованість”, яке використовував ще Ч. Дарвін в якості кількісної
міри природного добору або міри ефективності розмноження генотипу, зараз
набуло більш широкого змісту. Ймовірність дати нащадків визначається
багатьма властивостями організму – його життєздатністю, швидкістю
досягнення репродуктивного віку, здатністю до схрещування, стійкістю до
голодування, плодючістю. Сукупність цих властивостей називається
пристосованістю особини до умов середовища, в якому вона існує [Айала,
Кайгер, 1987].

Пристосованість часто ототожнюють з адаптацією, при цьому
пристосованість являється більш універсальним поняттям, що включає в
себе адаптацію як складовий компонент. Під адаптацією прийнято розуміти
складний комплекс захисних і пристосувальних реакцій (специфічних і
неспецифічних), що обумовлені різними генетично детермінованими
механізмами (фізіологічними, біохімічними, морфологічними).

Адаптація може бути модифікаційною, яка дозволяє організму в межах норми
реакції залишатися життєздатним і давати потомство в нових умовах, та
генотипічною, при якій перебудовується структура генотипу і утворюються
нові норми реакції. Генотипічна адаптація відбувається в процесі
природного та штучного добору і забезпечує пристосування організмів до
нових умов існування. Взаємодія вказаних двох систем адаптації
забезпечує максимальну пристосованість живих організмів до мінливих умов
навколишнього середовища.

Однією із показових характеристик пристосованості є стійкість до
голодування здатність вижити в екстремальних умовах нестачі корму. Так
як і інші фенотипічні характеристики пристосованості, стійкість до
голодування в значній мірі визначається генотипом, контролюється великою
кількістю взаємодіючих генів і проявляє значну мінливість в природних
популяціях. Ось чому генотипічно різним особинам зазвичай притаманна
неоднакова стійкість до голодування.

Улюбленим об’єктом генетичних досліджень є плодова мушка Drosophila
melanogaster – найбільш вивчений в цьому плані вид дрозофіли. Результати
тривалого дослідження дрозофіли дають можливість проаналізувати
різноманіття всього спектру мутацій, характер розподілу генів по різних
хромосомах, співвідношення домінантних та рецесивних мутацій та ін. Ці
дані являють собою загальногенетичну цінність і дозволяють прогнозувати
генетичні ситуації, з якими ймовірно можна зустрітися і у інших вищих
організмів. Використання в якості об’єкта генетичних досліджень плодової
мушки дрозофіли привело до значних успіхів в цій галузі [Тоцький,
Хаустова та ін., 2002].

Більшість тварин різних видів на протязі життя переживають періоди
скорочення раціону і тому у них еволюційно закріплені адаптації, що
підсилюють їх стійкість до голодування. Знання про генетичні та
фізіологічні засади цих адаптацій, їх еволюційні зв`язки (як
внутрішньовидові, так і популяційні) отримані значною мірою завдяки
дослідженням на дрозофілі. Так відомо, що окремі мухи можуть направлено
посилювати стійкість до голодування у відповідь на легкий харчовий стрес
(Harshmann,1998).

Зважаючи на вищезазначене, метою роботи було вивчення тривалості життя в
умовах голодування та визначення активності алкогольдегідрогенази у мух
із природних популяцій України.

Згідно із метою були визначені наступні завдання:

1). В умовах голодування дослідити тривалість життя та визначити статеві
особливості стійкості до голодування у мух досліджуваних популяцій.

2). Визначити активність АДГ у мух досліджуваних популяцій.

Об’єкт дослідження ? пристосованість Drosophila melanogaster.

Предмет дослідження ? стійкість до голодування та активність АДГ у
Drosophila melanogaster різного походження.

1. Огляд літератури

1.1 Стійкість до голодування як показник пристосованості Drosophila
melanogaster

Тривалість життя дорослої мухи з моменту її вилуплення із лялечки в
лабораторних умовах складає 3 – 4 тижні та в значній мірі залежить від
умов утримання (температури, вологості, якості корму, густоти заселення,
наявності бактерій). В спеціальних дослідах дрозофіла жила до 153 днів
(Медведєв, 1966). Самки, як правило, мають більшу тривалість життя, ніж
самці, що може бути викликане генетичними та фізіологічними причинами.

Справді, про більшу тривалість життя самок було сказано давно. Ще Дарвін
розглядав меншу тривалість життя самців як “природню конституційну
властивість, що обумовлена статтю” (Гаврилов, 1991). Таким чином факти
про більшу життєздатність особин жіночої статі мають право на існування.

Відмінності в тривалості життя в межах однієї статі, як правило, можуть
бути зумовлені фізіологічними причинами. Так, віргінні самки, мають
більшу тривалість життя, ніж запліднені (Зіміна, Малиновський, 1977).
Згідно із літературними даними, направленість статевих відмінностей в
резистентності до голодування є генетично детермінованою (Хаустова,
1995). Вивчення тривалості життя самок та самців дрозофіли в умовах
харчового стресу – цікава і водночас важлива проблема сучасної генетики
та науки в цілому.

Стресом можна назвати певний фактор середовища, внаслідок дії якого
послаблюється стійкість організму до даного чинника. Якщо організм зміг
вижити після дії стресового фактора, то у нього виробляються специфічні
адаптації, що пом’якшують наслідки при повторній його дії (Haffman,
Parsons, 1991; Randall, 1997). Однією із найбільш поширених причин
харчового стресу у тварин, у тому числі і у дрозофіли, є скорочення
кількості їжі або її недостатня якість.

Відомо, що енергетичні процеси відіграють центральну роль в організмі,
тому голодування провокує зміни на різних рівнях прояву фенотипу – від
змін внутрішньоклітинних сигналів – до зсувів фаз життя в онтогенезі.

Існує думка, що збільшена тривалість життя потребує від організмів
певних змін, які, скоріш за все, взаємопов`язані і з іншими характерними
рисами пристосованості виду. Отже, природний добір повинен підтримувати
ті генотипи, що здатні змінювати свої фізіологічні особливості для
підвищення стійкості до голодування у відповідь на сигнали, що
сповіщають про початок періоду голодування. Іншими словами, очікується,
що дана ознака в деякій мірі покаже рівень адаптивної фенотипічної
пластичності (Partridge, 2005).

Встановлено, що скорочення кількості їжі (в основному дріжджів) для
дорослих мух, призводить до збільшення їх витривалості майже в два рази
в порівнянні з тими, які взагалі не отримували дріжджі з їжею
(Chippindale et al., 1998; Leroi et al., 1994; Kapahi et al., 2004;
Piper et al., 2005; Burger et al., 2007). В той же час показано, що у
мух, які піддавались надто тривалому обмеженню раціону, виживаність
навпаки знижувалась (Burger et al., 2007).

Відомо, що підвищена стійкість до голодування та до інших чинників
стресу визначає стан особини під час діапаузи, яка може бути викликана
низькими температурами або коротким фотоперіодом. Це означає, що певній
особині буде легше витримати період діапаузи, якщо у неї виробилась
висока витривалість під час голодування, пережитого раніше.

Варто також зазначити, що механізми фізіологічних реакцій на харчовий
стрес зберігаються і закріплюються у особин усього тваринного світу
(Tatar; 2003; Partridge et al., 2005; Arsham, Neufeld, 2006). Таким
чином, дані щодо розуміння генетики і фізіології адаптації до
голодування, отримані в експериментах на дрозофілі, можна застосовувати
не лише до мух, а й до комах та деяких інших тварин взагалі.

Практично у всіх дослідженнях, що стосуються вивчення стійкості до
голодування Drosophila melanogaster, мова йде про гостре голодування,
тобто повне позбавлення їжі (Huey, 2004). Але в роботах деяких авторів
показано, що мухи дрозофіли також дуже чутливі до нестачі води, адже
існує досить тісний зв`язок між стійкістю до голодування та здатністю
витримати нестачу вологи (Partridge, Piper, 2005). Виходячи із наведених
даних автори рекомендують вносити воду у вигляді вологих пробок чи
смужок фільтрувального паперу до середовища, де голодують мухи. Отже, цю
рекомендацію варто враховувати при постановці експериментів.

Зазвичай тривалість життя особин за голодування визначають як час, що
проходить до загибелі 50% (Lt 50) мух в умовах досліду. В залежності від
генотипу та умов середовища, середній час виживання без корму
коливається від 20 годин для самців і до більш ніж 50 годин для самок
(Harshman , Shmidt, 1998; Harshmann, 1999; Baldal, 2005; Harbison,
2005).

Еволюційний взаємозв’язок між голодуванням та тривалістю життя був
підтверджений деякими експериментами з використанням методів селекції.
Дані відносно дрозофіл отримані головним чином в дослідженнях на
Drosophila melanogaster. Досліджувані лабораторні лінії дрозофіли,
відібрані за ознакою тривалості життя, за даними деяких авторів (Rose,
Archer, 1996) демонстрували і відносно кращу стійкість до голодування.
За даними інших авторів (Rose et al., 1992) в свою чергу, селекція на
стійкість до голодування в умовах експерименту призводила до збільшення
тривалості життя. В ході досліджень також було з’ясовано, що мутанти
Drosophila melanogaster з великою тривалістю життя зазвичай є стійкими і
до інших чинників стресу (Lin, Benzer, 1998).

Добре відомо, що гени всіх живих організмів кодують інформацію для
синтезу білкових молекул, із яких створюються всі компоненти клітин
живих організмів та які приймають участь у каталізі всіх біохімічних
процесів. Фактично кожну біохімічну функцію чи елемент тіла у дрозофіли
вдалося пов’язати із дією того чи іншого гена (Тоцький, 2002).
Усестороннє розуміння еволюційних механізмів становлення стійкості до
голодування потребує ідентифікації та характеристики генних локусів, що
вносять вклад в спадкову мінливість цієї ознаки та лежать в основі її
еволюційних змін. Мутації або ж маніпуляції з експресією генів, що
посилюють витривалість до голоду, вказують на можливості її змін в
штучних умовах, але досі залишається незрозумілим чи мають встановлені
зміни місце у природі.

Певне розуміння генетичних аспектів, а саме успадковування та мінливість
стійкості до голоду, може бути отримане шляхом аналізу схрещувань між
стійкими та нестійкими генотипами. Вчені використали цей підхід для
вивчення генетичної структури відмінностей між двома парами географічно
віддалених популяцій дрозофіли із Південної Америки та Австралії.
Цікавим виявилось те, що обидві статі мух у Південній Америці та самки
дрозофіл у Австралії виявляли позитивні ефекти домінування по
материнській лінії, тобто нащадки виявляли вищу стійкість до
голодування, якщо ця ознака була високою у матері.

Разом із простим материнським ефектом були виявлені також парадоксальні
результати, а саме: менш стійкі до голоду матері давали більш стійких
нащадків обох статей. Причини виявлених закономірностей і досі
залишаються невідомими.

Результати, отримані при картуванні генів кількісних ознак, а також дані
тестування на кількісну комплементацію (Mackay, Fry, 1996) дозволили
визначити шлях до ідентифікації специфічних локусів, що відповідають за
неоднакову стійкість до голодування. Як випливало із попередніх даних,
природний поліморфізм локусу десатурази-2 міг впливати на стійкість мух
до голодування (Greenberg et al., 2003), але подальші експерименти
(Coyne, Elwyn, 2006) не підтвердили це припущення. Використовуючи більш
комплексний підхід, було ідентифіковано 13 локусів (6 із них мали
статево-специфічний ефект), які вносять вклад в розбіжності щодо
стійкості до голодування між двома лабораторними лініями мух. Ці локуси
включають гени, що беруть участь в оогенезі (ген l(2)G270 впливає на
розвиток яйцеклітини) та метаболізмі (гени, що регулюють розподіл
жирів). Також були визначені гени, що впливають на харчову поведінку мух
(наприклад, ген NaСР60Е).

Вченими також вивчалися зміни в експресії генів, викликані умовами
голодування. Даний підхід не є досить інформативним щодо генетичної
мінливості здатності витримати голод, але проливає світло на молекулярні
механізми відповіді на харчовий стрес. При голодуванні гени, що задіяні
в біосинтезі білків і гідролазній активності, мають тенденцію до
неврегульованості та надлишкового синтезу. Таким чином організм
намагається компенсувати нестачу поживних речовин і, як наслідок,
пережити несприятливі умови голодування.

Відмінності в ході добору по стійкості до голодування можуть призводити
до відмінностей за цією ознакою між популяціями. Докази таких
відмінностей знайдені при вивченні великих географічно віддалених
популяцій. Вченими було показано, що на Індійському півострові має місце
негативна кореляція між стійкістю до голодування та географічною широтою
для п’яти видів дрозофіли (включаючи і Drosophila melanogaster).
Аналогічним чином, розподіл по довготі був недавно показаний для двох
інших видів дрозофіли на Індійському півострові (Parkash, 2005).
Навпаки, позитивна кореляція між досліджуваною ознакою та широтою у
Drosophila melanogaster, була виявлена на сході Південної Америки
(Schmidt, 2005). В той же час ніяких варіацій по даній ознаці не було
виявлено у особин з Південної Америки та Східої Австралії. Таким чином,
наведені дані свідчать про те, що залежність між стійкістю до
голодування та географічною широтою підтверджується не завжди.

Аналізуючи дані літератури щодо стійкості до голодування особин
популяції Drosophila melanogaster, можна відзначити, що за останні роки
були проведені дослідження, спрямовані на розкриття молекулярних та
фізіологічних механізмів відповіді на харчовий стрес. Існує думка, що
дана ознака відтворює рівень адаптивної пластичності та являється
частиною механізму виживання, який може частково піддаватися інсуліновій
системі регуляції.

Що стосується розуміння екологічних аспектів витривалості до
голодування, то і досі залишається багато питань відносно природного
добору за цією ознакою.

Дрозофіла надає унікальну можливість для повноцінного розуміння та
інтеграції різних аспектів еволюційної відповіді на харчовий стрес.

1.2 Активність алкогольдегідрогенази у Drosophila melanogaster

Механізми адаптації генотипів та популяцій до дії екологічних факторів є
досить цікавими і тому інтенсивно вивчаються в багатьох лабораторіях. В
даному контексті вважається доцільним вияснити роль ферменту
алкгольдегідрогенази (АДГ) в життєдіяльності та адаптації у Drosophila
melanogaster. Ген-ензимна система АДГ на протязі тривалого часу притягує
увагу численних дослідників в різних областях генетики – від
молекулярної до популяційної, завдяки відносно простій ідентифікації
ферменту, значному поліморфізму і тій ключовій ролі, що АДГ відіграє в
життєдіяльності дрозофіли (цей фермент допомагає здійснювати
детоксикацію та утилізацію спирту, який являється важливим компонентом
середовища існування плодової мушки).

Фермент АДГ (по класифікації ферментів – КФ 1. 1. 1. 1.) відноситься до
класу оксидоредуктаз, об`єктом дії яких є група СН-ОН.

Ацетальдегід + НАДН + Н+ ? етанол + НАД

Алкогольдегідрогеназа широко розповсюджена в природі.
Алкогольдегідрогеназна активність притаманна різним клітинам всіх живих
організмів.

Піридиновий нуклеотид в якості коферменту відіграє головну роль в
реакції з усіма вивченими АДГ, при цьому фермент може окислювати не лише
етанол, але й інші первинні та вторинні спирти [Діксон, 1982]. При
перетворенні етилового спирту в ацетальдегід спостерігається
впорядкована багатоточкова взаємодія в АДГ між ферментним білком,
субстратом і коферментом.

АДГ дрозофіли складається із двох субодиниць з молекулярною масою 60 кДа
та відрізняється від інших алкогольдегідрогеназ відсутністю Zn2+. Крім
цього АДГ дрозофіли проявляє неабияку спорідненість до вторинних
спиртів. Швидкість реакції, що каталізується АДГ Drosophila
melanogaster, при використанні вторинних спиртів як субстратів, в
декілька разів більша, ніж швидкість окислення етанолу. Амінокислотна
послідовність АДГ дрозофіли відрізняється від інших
алкогольдегідрогеназ. При картуванні пептидів АДГ Drosophila
melanogaster виявлена наявність активного залишку цис-135 в домені, що
зв’язує НАД+, а також двох залишків амідів на С-кінці пептиду. Таким
чином, буде відрізнятися також і механізм дії АДГ дрозофіли – даний
фермент формує нестійкий комплекс із субстратом і коферментом [Chambers,
1984].

Алкогольдегідрогеназа відіграє головну роль в каталізі останнього етапу
спиртового бродіння, що притаманне дріжджам, а також тканинам, що
знаходяться в анаеробному стані [Ленінджер,1985; Страєр, 1985]. Для АДГ
плодової мушки більш характерною є зворотна реакція окислення спиртів до
альдегідів чи кетонів, оскільки спирти є важливим компонентом середовищ
існування дрозофіли. Drosophila melanogaster відрізняється від інших
видів дрозофіли здатністю використовувати етанол та інші спирти як
джерела поживних речовин на різних стадіях свого розвитку. АДГ є
основним ферментом в метаболізмі етилового спирту у мух. Мутанти, яким
не притаманна алкогольдегідрогеназна активність, є дуже чутливими до
токсичної дії спирту та не можуть використовувати його [Economos, 1986 ;
McKechnie , 1984].

Більш детальне вивчення системи метаболізму етанолу у D. melanogaster та
деяких інших видів дозволило виявити наявність двох самостійних
ферментів: алкогольдегідрогенази та альдегіддегідрогенази, що приймають
безпосередню участь у деградації етилового спирту, а також встановити
пряму кореляцію між їх активностями у дорослих особин. Це дало вагому
підставу припустити, що у дрозофіли окислення етанолу здійснюється через
ацетальдегід шляхом послідовної дії двох вищезазначених [Garcin, 1986,
Lietart,1985]. Наявність альдегіддегідрогенази виявляється переважно у
фракції мітохондрій, а алкогольдегідрогенази – в цитозолі [Lietart,
1985; Garcin, 1986].

Результати численних досліджень показали наявність в усіх природних
популяціях Drosophila melanogaster двох варіантів АДГ, що відрізняються
электрофоретично – АДГ-F и АДГ-S. Вони знаходяться під контролем
структурного гена Adh, що локалізований в хромосомі 2 в положенні 50.1.
Амінокислотні послідовності білків класу АДГ-F відрізняються від таких
класу АДГ-S заміною лізину на треонін в позиції 192. Ця амінокислотна
заміна торкається тієї області, яка являється каталітичним доменом
ферменту, що і лежить в основі різниці у відносній активності,
термостабільності та інших властивостях алозимів [Chambers, Wilks et
al., 1984]. Завдяки генетичному поліморфізму, локус Adh відіграє важливу
роль в генотипічній адаптації дрозофіли до факторів зовнішнього
середовища.

При електрофорезі в поліакриламідному гелі АДГ виявляється в виді двох –
трьох зон із головною катодною смугою (АДГ-5) та додатковими більш
рухливими смугами (АДГ-3 і АДГ-1). У АДГ-S, яка є менш рухливою, смуги
на електрофореграмах зміщуються ближче до катоду і займають положення 7,
5, 3 відповідно [Крутовський, 1983; Chambers, 1984; 1991; Johnson, 1964;
Schwartz, 1976].

Встановлено, що при тривалому голодуванні мух, або при їх обробці
низькими концентраціями ацетилацетону, проявляється високий рівень
експресії АДГ-1 та АДГ-3 за рахунок конверсії алозимного спектру. Дія на
мух різних концентрацій етанолу призводила до ретроконверсії
молекулярних форм АДГ [Heinstra, 1986].

Припускається [Mckechnie, 1984], що взаємне перетворення модифікованих
молекул АДГ, що характеризуються різною стабільністю та кінетичними
характеристиками, є важливою ланкою в складній системі адаптації
Drosophila melanogaster до екзогенного етанолу. Відповідно до цієї
гіпотези екзогенний етанол стимулює ріст активності АДГ, збільшуючи
співвідношення НАДН / НАД, тим самим знижуючи відносну кількість АДГ-1
на користь АДГ-3 та АДГ-5.

Здійснюючи регуляцію рівнів НАД / НАДН і НАДР / НАДРН, які в свою чергу
регулюють розпад інших ферментів, АДГ також впливає на життєздатність
дрозофіли [Xinmi, 1992]. Очевидно, такий спосіб регуляції активності
фермента ? найбільш важливий в процесах адаптації [Anderson,1983].

Численні дослідження показали, що здатність мух до існування в умовах з
високим вмістом алкоголю знаходяться в залежності від рівня активності
їх АДГ [Pecsenye, 1994; 1997]. Хоча вирішальне значення для виживання
мух при збільшених концентраціях спирту відіграє абсолютна кількість
АДГ, а не активність ферменту [Anderson, 1983]. Це підтверджено
імунохімічними та молекулярно-біологічними дослідженнями. Так,
встановлено, що кількість білку АДГ визначається швидкістю синтезу, що
позитивно корелює із рівнем цитоплазматичної мРНК [Anderson,1983;
Birley, 1984]. Таким чином, регуляцію активності АДГ за рахунок зміни
кількості ферментного білку на різних стадіях розвитку Drosophila
melanogaster можна вважати достовірно встановленою.

В зв’язку із важливою роллю ген-ензимної системи АДГ в процесах
метаболізму і адаптації дрозофіли, рівень активності та інші
характеристики алкогольдегідрогенази можна розглядати як критерій
пристосованості генотипу.

2. Матеріали та методи досліджень

Дослідження проводили на мухах Drosophila melanogaster, що відносяться
до родини Drosophilidae із відділу Diptera. Дрозофіла є класичним
об’єктом генетичних досліджень, завдяки наступним властивостям.
По-перше, у неї порівняно короткий період онтогенезу; по-друге, вона
легко виживає та розвивається в лабораторних умовах, а також не потребує
значних витрат на розведення та харчування.

Для цих мух комфортною температурою вважається 24 – 25?С. При такій
температурі цикл розвитку дрозофіли від яйця до дорослої мухи складає
приблизно 10 діб. Розвиток яйця триває 20 годин, а розвиток личинки і
лялечки – 8 діб. Таким чином за рік можна отримати до 40 поколінь
дрозофіли. При температурі вищій за 31?С дрозофіла стає безплідною, хоча
в природних умовах вона може витримувати і більш високі температури. Зі
зниженням температури цикл розвитку мух дуже уповільнюється. Так, при
температурі 10?С період личинки та лялечки значно зростає у часі.

культивування мух із досліджуваних популяцій проводили у скляних банках
(200 мл) при температурі 24?С у стандартних умовах. для годування
дрозофіли зазвичай використовують корм із дріжджами. Крім них також
використовували: цукор як субстрат для розвитку дріжджів та агар-агар,
що надає корму желеподібної консистенції. Харчову масу готують із
наступних співвідношень компонентів на 1 літр води:

агар-агар – 50 г

цукор-пісок – 36г

манна крупа – 36г

дріжджі – 27г

В ході експерименту аналізу піддавали мух із популяцій різного
походження – К (Київ), Од (Одеса), В (Варва), П (Пирятин), Оз (Озеро із
Чорнобильської зони) та сад (Яблуневий сад із Чорнобильської зони), що
були люб`язно надані співробітниками кафедри генетики Київського
національного університету ім. Т.Г. Шевченка.

Тривалість життя мух за голодування досліджували наступним чином. У
пробірки (10 мл) без корму поміщали окремо по 10 самок та самців кожної
популяції. Використовували особин триденного віку, попередньо на протязі
трьох діб вони мали можливість харчуватися. Спостереження за
досліджуваними мухами проводили з інтервалом у три години (вісім разів
на добу). При цьому визначалася кількість особин, що вижили. В перші дні
досліду смертність мух ще не дуже висока, пізніше починається масова їх
загибель. Підрахунок вели до моменту загибелі половини мух у пробірці
(Lt50). Тривалість життя мух за умов голодування виражали у годинах.
Досліди проводили в десятикратній повторності.

Активність АДГ в экстрактах тканин дрозофіли визначали
спектрофотометрично на СФ-26, використовуючи інкубаційну суміш
наступного складу: 0,05 М тріс-НCL буфер, pH 8,5; 1,2 мM NAD+; 0,1 M
спирт. Активність ферменту оцінювали по збільшенню вмісту NADН в
середовищі інкубації на протязі 3 хвилин. В якості субстрату
використовували ізопропанол. Активність АДГ виражали в нмолях NADН/хв?мг
білку [McKechnie, Geer, 1984].

Статистичну обробку отриманих даних здійснювали за допомогою критерія
Стьюдента (Рокицкий, 1973)

1). Визначали середнє значення тривалості життя в умовах голодування:
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, де

М – середнє значення тривалості життя при голодуванні; n – кількість
дослідів.

2). Визначали квадратичне відхилення:
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, де

М – а – різниця середнього та індивідуальних значень тривалості життя.

3). Визначали помилку середньоарифметичного значення тривалості життя:
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, де

m – помилка середньоарифметичного значення; ? – квадратичне відхилення

При р > 0.05 відмінності не достовірні;

Якщо р

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Ответить

Курсовые, Дипломы, Рефераты на заказ в кратчайшие сроки
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020