.

Вікові особливості морфофункціонального стану надниркових залоз при зміні імунного статусу (реферат)

Язык: украинский
Формат: реферат
Тип документа: Word Doc
114 3136
Скачать документ

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ’Я УКРАЇНИ

КРИМСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

ім. С.І. ГЕОРГІЄВСЬКОГО

Овчаренко Володимир Вікторович

УДК: 591.147.6:615.3576 – 53

Вікові особливості морфофункціонального стану надниркових залоз при
зміні імунного статусу

(АНАТОМО-ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ)

14.03.01 – нормальна анатомія

Автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата медичних наук

Сімферополь – 2005

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана у Луганському державному медичному університеті,
Міністерство охорони здоров’я України.

Науковий керівник: Заслужений діяч науки і техніки України, лауреат
Державної премії України, доктор медичних наук, професор Ковешніков
Володимир Георгійович, Луганський державний медичний університет,
завідувач кафедри анатомії людини.

Офіційні опоненти:

доктор медичних наук, професор Пикалюк Василь Степанович, Кримський
державний медичний університет ім. С.І. Георгієвського, завідувач
кафедри нормальної анатомії людини;

Заслужений діяч науки та техніки України, доктор медичних наук, професор
Шутка Богдан Васильович, Івано-Франківська державна медична академія,
завідувач кафедри анатомії людини

Провідна установа:

Харківський державний медичний університет, Міністерство охорони
здоров’я України.

Захист відбудеться “ 23 ” березня 2005 р. о 14 годині на засіданні
спеціалізованої вченої ради Д 52.600.02, при Кримському державному
медичному університеті ім. С.І. Георгієвського (95006, м. Сімферополь,
бульвар Леніна, 5/7).

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Кримського державного
медичного університету ім. С.І. Георгієвського (95006, м. Сімферополь,
бульвар Леніна, 5/7).

Автореферат розісланий “ 17 ” лютого 200 5 р.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради,

кандидат медичних наук, доцент
Новіков М.Ю.

Здано до набору 03.02.2005. Підписано до друку 07.02.2005.

Формат 60х84 1/16 . Папір офсетний. Друк офсетний.

Умовн. друк. арк. 0,8. Тираж 100. Зам. 208. Замовне.

Віддруковано у видавничому центрі ЛугДМУ.

91045, м. Луганськ, кв. 50 років Оборони Луганська, 1.

Загальна характеристика роботи

Актуальність теми. В останні десятиліття все більш зростає
зацікавленість до пізнання ролі морфофункціональних змін у надниркових
залозах як важливій ланці ендокринних органів, що відіграють значну роль
у загальному ансамблі компенсаторно-пристосувальних реакцій усього
організму.

В умовах усезростаючої урбанізації, посилення стресових впливів на
організм людини, вивчення адаптаційних змін у надниркових залозах,
встановлення морфофункціональних зрушень у цих органах з метою їх
корекції й досягнення оптимального рівня функціонування набуває все
більшого значення.

Не підлягає сумніву той факт, що існує тісний взаємозв’язок між
ендокринною та імунною системами, необхідний для підтримки генетичного
та фізіологічного гомеостазу організму (Валуева Т.К., Малыжев В.А.,1970;
Корнева Е.А., Шхинек Э.К., 1988).

Численними експериментальними даними встановлено, що наднирки
знаходяться в антагоністичних відносинах з тимусом (Чеснокова В.М.,
Хмельницкий О.К. и соавт., 1989). Існує гіпотеза, що під контролем
наднирків відбувається нормальна фізіологічна інволюція тимуса в
онтогенезі (Бутенко Г.М. и соавт., 1999). Встановлено існування тісних
взаємозв’язків між корою наднирків, тимусом, щитоподібною залозою,
гіпофізом (Зозулякова С.В. и соавт., 1987; Чеснокова В.М. и соавт.,
1989). Відомо також, що на функціональну активність кор.кової речовини
наднирків істотно впливають ряд гормоноподібних речовин, що продукує
тимус (Покровская Е.В., Резников А.Г., 1989; Шулигина А.Б. и соавт.
1989;). Крім того, гормони тимуса необхідні для перетворення незрілих
лімфоцитів в імунокомпетентні клітини (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000).

Одним із факторів, що визначає рівень імунологічної реактивності
організму, є морфофункціональний стан наднирків. Проте в літературі
практично відсутні дані про морфогенез надниркових залоз в умовах
імунодефіциту та при стимулюванні імунітету деякими чинниками в різних
вікових періодах та при різних строках спостереження.

Важливість вивчення морфофункціонального стану надниркових залоз в
умовах зміненого імунного статусу зумовлює актуальність цього
дослідження.

Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами

Дисертаційна робота є складовою частиною науково-дослідницької теми
кафедри нормальної анатомії людини Луганського державного медичного
університету “Особливості морфогенезу кісткової, імунної та ендокринної
систем під впливом екологічних чинників” (№ держреєстрації О103U006652).

Мета дослідження. Встановити закономірності морфогенезу надниркових
залоз в умовах застосування імуностимулюючого препарату тимогену та
після тимектомії в різних вікових групах та при різних строках
спостереження.

Задачі дослідження. Для досягнення встановленої мети були сформульовані
такі задачі:

Створити програмно-апаратний комплекс для морфометрії наднирків.

Розробити програмне забезпечення для тривимірної реконструкції
біологічних об’єктів.

Вивчити морфофункціональні особливості надниркових залоз контрольних
тварин усіх вікових груп (статевонезрілі, статевозрілі та старі) при
різних строках спостереження (7, 15, 30, 90 та 180 діб).

Дослідити динаміку морфофункціональних особливостей надниркових залоз
щурів в умовах експерименту.

Провести кількісне морфометричне дослідження морфологічних параметрів
наднирків вищезазначених груп тварин.

Провести ультрамікроскопічне дослідження структури коркової речовини
надниркових залоз статевозрілих щурів після введення тимогену та
тимектомії.

Виконати тривимірну реконструкцію наднирків щурів з подальшим
морфометричним дослідженням отриманих тривимірних моделей.

Об’єкт дослідження: наднирки білих безпородних щурів в умовах
імуностимуляції та імуносупресії.

Предмет дослідження: морфогенез коркової та мозкової речовини наднирків
щурів контрольних та дослідних груп, що знаходяться в умовах
застосування імуномодулюючого препарату тимогену та після тимектомії.

Методи дослідження: органометрія, світлова мікроскопія, комп’ютерний
морфометричний аналіз гістологічних зрізів надниркових залоз, тривимірна
реконструкція наднирків за серійними гістологічними зрізами, електронна
мікроскопія, статистичні методи.

Наукова новизна отриманих результатів. Виконано цілеспрямоване вивчення
морфологічних особливостей будови надниркових залоз щурів в умовах
створення імунодефіциту, викликаного тимектомією, а також при стимуляції
імунітету тварин після введення тимогену. Вивчено морфофункціональні
особливості всіх зон коркової речовини наднирків у щурів різного віку
при тимектомії та після введення препарату тимогену. Уперше проведено
тривимірну реконструкцію надниркових залоз щурів за серійними
гістологічними зрізами, встановлено закономірності їх просторової
організації та вияснено співвідношення різних зон коркової та мозкової
речовини в цілісному наднирку.

Практичне значення отриманих результатів. Встановлено особливості
морфофункціонального стану наднирків щурів після тимектомії та введення
тимогену в різні вікові періоди життя та при різних строках
спостереження. Отримані результати можуть використовуватись як для
прогнозування та корекції функціонального стану наднирків при
імунодепресивних станах, так і при імуностимулюючій терапії в різних
вікових категоріях та при різних термінах спостереження, а також для
корекції відхилень у морфофункціональному стані наднирків при
оперативних втручаннях, що супроводжуються видаленням тимуса. Основні
положення та висновки дисертаційної роботи впровадженi в учбовий процес
та науково-дослідницьку роботу ряду морфологічних кафедр медичних ВУЗів
України (Сумського державного університету, Дніпропетровської медичної
академії, Донецького медичного університету, Івано-Франківської
державної медичної академії, Тернопільської державної медичної академії
та інших).

Особистий внесок здобувача. Здобувачем виконана розробка теоретичних та
практичних положень роботи. Автор самостійно провів експеримент щодо
моделювання імуносупресивного (тимектомія) та імуномодульованого
(використання тимогену) станів у щурів різного віку. У процесі виконання
дисертаційної роботи розробив та використав такі інструменти та
пристрої: “Пінцет для тимектомії” (деклараційний патент України
№64156А); “Пристрій для вимірювання об’єму невеликих біологічних
об’єктів” (позитивне рішення про видачу деклараційного патенту
№2003031962); “Прилад для ультразвукової проводки гістологічного
матеріалу” (пріоритетна довідка №2003031962). Провів обробку матеріалу,
виготовлення гістологічних зрізів та забарвлення препаратів. Автором
створена комп’ютерна програма для морфологічних досліджень “Morpholog”
(свідоцтво про держреєстрацію №9604), розроблено програмне забезпечення
для тривимірної реконструкції біологічних об’єктів, проведено
мікрофотографування та обробку отриманих зображень кількісними
морфометричними методами. Виконана тривимірна реконструкція наднирків
щурів за серійними гістологічними зрізами. Проведена статистична обробка
отриманих результатів, їх документація, аналіз та узагальнення,
сформульовані основні положення та практичні висновки роботи. Написані
наукові статті та текст дисертації. У спільних публікаціях не
використовувався матеріал співавторів.

Апробація результатів дисертації. Основні матеріали дисертаційної роботи
апробовані на III Національному конгресі АГЕТ України (Київ, 21-23
жовтня, 2002); Всеукраїнській конференції молодих вчених і студентів
„Інтернет-технології в медицині і біології” (Луганськ, 24-25 лютого,
2004); I Всеукраїнській науково-практичній конференції „Актуальні
проблеми біомінералогії” (Луганськ, 05-06 травня, 2004); Ювілейній
науково-практичній конференції викладачів (Луганськ, 23 вересня, 2004),
засіданні товариства АГЕТ (Луганськ, 19 листопада, 2004).

Структура та обсяг дисертації. Матеріали дисертації викладено на 201
сторінках машинопису, що містять у собі розділи: введення, огляд
літератури, матеріал та методи дослідження, експериментальну частину,
розділи, присвячені кореляційному та дискримінантному аналізу,
тривимірній реконструкції надниркових залоз щурів за серійними
гістологічними зрізами, аналіз та узагальнення результатів дослідження,
висновки, список використаних джерел. Список літератури містить 248
джерел, із них – 233 вітчизняних авторів та 45 – іноземних. У роботі
використано 13 таблиць, 132 малюнки, серед яких 82 мікрофотографії, 7
електронограм і 22 діаграми (обсяг 10 сторінок). Додаток – 8 сторінок.

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 7 наукових праць,
серед яких 5 у спеціалізованих фахових виданнях, рекомендованих ВАК
України (4 – самостійно). Автором отримано 1 деклараційний патент, 1
авторське свідоцтво, одне позитивне рішення на винахід, та одна
пріоритетна довідка на винахід.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Матеріали та методи. Дослідження було проведене на 480 білих
лабораторних безпородних щурах-самцях.

Виділяли такі експериментальні групи: тварини після тимектомії; тварини
після введення тимогену. Залежно від віку всі щури були розподілені в
такі вікові підгрупи: статеневозрілі – віком 4 тижні, статевозрілі –
віком 16 тижнів, та старі – віком 18 місяців. Тварин виводили з
експерименту на 7, 15, 30, 90, 180 добу після тимектомії або закінчення
курсу введення тимогену.

Контролем до тимектомованих щурів були тварини з несправжньою
тимектомією, при якій проводили всі ті ж самі етапи операції, окрім
мобілізації та видалення тимусу.

Тваринам другої дослідної групи внутрішньоочеревинно вводився препарат
тимоген виробництва ОАО “Днепрофарм” Україна П/96/158/6 у дозі 1мкг/кг
маси тіла протягом 10 днів.

Розрахунок дозування лікарських препаратів робили з урахуванням
рекомендацій Ю.Р. та Р.С. Риболовлєвих (1979). Формула розрахунку має
такий вигляд:

де r – коефіцієнт видової витривалості для щура =3,62, R – для людини
=0,57.

Контролем до цієї групи були тварини, яким внутрішньоочеревинно вводили
фізіологічний розчин в еквівалентних до тимогену об’ємах протягом 10
днів.

Забій тварин проводили в один і той же час доби. Щурів після ефірного
наркозу зважували на вагах та декапітували, розтинали черевну порожнину,
відпрепаровували та забирали надниркові залози, зважували їх на
торзійних вагах з чутливістю 1 мг та визначали об’єм за допомогою
пристрою для визначення об’єму невеликих біологічних об’єктів.

Після фіксації матеріал промивали в проточній воді протягом 1 години.
Потім за методикою прискореного виготовлення гістологічних зрізів
матеріал обезводжували в спиртах та проводили в толуолі під впливом
ультразвукового озвучення. Після цього препарати заливали в суміш
(парафін + віск + стеаринова кислота). На санному мікротомі виготовляли
серійні гістологічні зрізи товщиною 3-4 мкм, забарвлювали
гематоксилін-еозином та поміщали в канадський бальзам.
Мікроморфометричне дослідження надниркових залоз проводили на
комп’ютерному морфометричному комплексі, до складу якого входять:
мікроскоп Olympus BX-41, цифровий фотоапарат Olympus C5050Z з
п’ятимегапіксельною матрицею, що з’єднаний з мікроскопом системою
відеоадаптерів цієї ж фірми. До складу комплексу також входить
персональний комп’ютер Athlon XP 2200+ Mh, DDR RAM 512 mB, HDD 128 Gb,
video: GeForce FX5200 128Mb, що обладнаний платою відеозахвату,
з’єднаний з цифровою камерою за допомогою USB інтерфейсу, а також за
допомогою відеокабелю.

На зрізах гістопрепаратів надниркових залоз вивчали абсолютну та
відносну площу клубочкової, пучкової та сітчастої зон коркової та
мозкової речовини наднирка. Визначали площі ядер адренокортикоцитів усіх
зон коркової речовини наднирка. Підраховували кількість ядер
адренокортикоцитів на 1000 мкм2 у кожній зоні.

Для отримання лінійних розмірів ядер адренокортикоцитів, кількості ядер
клітин на 1000 мкм2, їх площі, розмірів зон тощо цифрові зображення
завантажували в оригінальну комп’ютерну програму “Morрholog”.
Морфометричні дані експортувалися в програму Excel для подальшої
статистичної обробки та зберігання. У таблиці Excel також експортувалися
дані органометрії, за допомогою вбудованих функцій та розроблених
автором у середовищі Visual Basic for Application функцій, процедур та
форм. Подальше проводилася первинна статистична обробка отриманих
результатів.

За допомогою програмного забезпечення проводили тривимірну
реконструкцію надниркових залоз за серійними гістологічними зрізами та
виконували морфометричний аналіз отриманих тривимірних моделей.

З одного препарату було обчислено не менше 10 полів зору (знімків), у
кожній зоні коркової речовини наднирка досліджувалося 800 – 3000 ядер
адренокортикоцитів при збільшенні 400х.

Для електронно-мікроскопічного дослідження шматочки надниркових залоз
розміром 1 мм3 занурювали спочатку в глютаральдегідний фіксатор на 24
години, потім – у 1% тетраоксид осмію за Паладе на 1 год. Після
дегідратації в етиловому спирті зростаючої концентрації та абсолютному
ацетоні матеріал заливали сумішшю епоксидних смол (епон-аралдит).
Полімеризацію проводили протягом 36 годин при 60?С. Напівтонкі зрізи,
завтовшки 0,5-1,5 мкм, готували на ультратомі ЛКБ-4600. Зрізи
забарвлювали метиленовим синім і піроніном. Після дослідження
напівтонких зрізів проводили прицільну заточку пірамід блоків.
Ультратонкі зрізи виготовляли на ультрамікротомі УМТП-4 Сумського ВО
“Ефектрон” (Україна), контрастували в розчині уранілацетату та цитраті
свинцю за Рейнольдсом, переглядали і фотографували в електронному
мікроскопі ЕМ-125.

Керуючись даними літератури про те, що під дією тимектомії та при
застосуванні гормонів тимуса виникають істотні зміни ендокринної функції
надниркових залоз, нами було проведене імуноферментне дослідження крові
експериментальних та контрольних груп тварин на рівень гормону кортизолу
в крові. Рівень кортизолу виявляли за допомогою тесту “Cortisol Elisa”
імуноферментним методом.

Первинну статистичну обробку отриманих результатів проводили за
допомогою статистичного пакету Excel, потім дані обробляли статистичною
програмою Statistica 6.0, використовуючи кореляційний та дискримінантний
методи аналізу.

Результати дослідження та їх аналіз. При аналізі морфометричних
показників наднирків статевонезрілих щурів встановлено, що найбільш
суттєва різниця між дослідними та контрольними тваринами спостерігається
на 30-ту добу після тимектомії. Так, маса наднирків тимектомованих
статевонезрілих щурів більша за контрольні показники на 66,32% (Р0,05) і є недостовірною.

У групі статевозрілих тварин зміни абсолютної маси наднирків також є
суттєвими. Максимальні показники маси спостерігаються на 7-му, 15-ту та
30-ту добу після тимектомії.

Об’єм наднирків при тимектомії в статевозрілих щурів достовірно
перевищує контрольні показники в усі строки спостереження, проте
максимальні показники різниці щодо контролю спостерігаються на 15-ту
добу після тимектомії та становлять 30,05%. У наступні строки
спостереження різниця між значеннями дослідних та контрольних груп
зменшується.

Площа пучкової зони коркової речовини наднирка статевозрілих щурів
перевищує контрольні показники протягом усіх строків спостереження.
Найбільш значна різниця між показниками дослідних та контрольних груп
відзначається на 30-ту добу спостереження та становить 24,60% (Р>0,05).
Площа ядер адренокортикоцитів більша за аналогічні показники контрольних
груп протягом усіх строків спостереження, проте максимальні відхилення
фіксуються на 30-ту добу та становлять 17,23%. Кількість ядер
адренокортикоцитів на 1000 мкм2 менша за контрольні показники максимум
на 17,85%, що спостерігається на 30-ту добу після тимектомії. У наступні
строки спостереження різниця поступово зменшується, досягаючи 7,55% на
180-ту добу.

Тимектомія в статевозрілих щурів також значно впливає й на площу
сітчастої зони коркової речовини надниркових залоз. Так, на 7-й день
спостереження зазначений показник перевищує аналогічний параметр у
контрольних тварин на 14,69% (Р–p ° ?–O–O–O–O– @ B D F H J p r c O $ O $ O O O O O O $ O O O Встановлено, що введення тимогену в організм білих лабораторних щурів впливає на морфофункціональний стан наднирків, призводить до зменшення їх функціональної активності, що проявляється в зміні ряду морфометричних показників. При дослідженні органометричних характеристик надниркових залоз статевонезрілих щурів після введення тимогену встановлено зменшення маси залоз протягом усіх строків спостереження з максимальними показниками відхилення від контролю на 15-ту добу – 33,72% (Р

Нашли опечатку? Выделите и нажмите CTRL+Enter

Похожие документы
Обсуждение

Ответить

Курсовые, Дипломы, Рефераты на заказ в кратчайшие сроки
Заказать реферат!
UkrReferat.com. Всі права захищені. 2000-2020